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新药研发与伴随诊断的同步开发策略与方法
2020/4/16-18，苏州
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当2019年12月8日，武汉市出现首例不明原因肺炎患者发病，相继多例病患陆续出现时，相关科研人员随后对病人样本进行了理化分析，并最终通过mNGS（宏基因组测序）对病原微生物进行分析，发现并确定了这次的肺炎病原为新型冠状病毒，近日也被WHO正式命名为COVID-19。这次从发病到诊断，只有短短几天时间，mNGS可谓是功不可没。
在后续突发新型冠状病毒肺炎疫情以来，感染病例快速上升。随着疫情的发展，全国各地乃至境外均有病例报道，防控力度必须加大，要做到及时对急重症及疑似患者进行诊断则需要快速有效的方法。
检测传染病的策略通常有两种：检测病原体本身，或检测人体为了抵抗病原体而产生的抗体。检测病原体既可以检测抗原 （一般是病原体表面蛋白，有些用内部核蛋白），也可以检测核酸。如果病人的体液中检测到抗体、抗原或核酸三者中的任何一种，则意味着已被感染。现在对NCP（Novel coronavirus pneumonia新型冠状病毒肺炎）的检测手段有实时荧光RT-PCR方法和胶体金试纸检测法，那就让我们来看一看这两种检测方法各有哪些优缺点。
实时荧光RT-PCR检测法
RT-PCR方法是当前普遍使用的、并且是在国家卫健委《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第四版）》中推荐的检查方法，这属于一种核酸检测方法，检测速度快、准确性高。
PCR检测的原理大致是：通过提取病人样本中的RNA，进行反转录·聚合酶链反应（RT-PCR），通过扩增反应将样本中微量的病毒信息加以放大，最后以荧光的方式读取信号。如果PCR之后信号为阳性，那么就可以说样本中存在病毒（已经感染），反之则说明没有感染。检测时间上，RT-PCR一般来说需要至少三四个小时才能完成。整套工序流水线操作的话，总共大概需要一个工作日，即6-8小时左右，检测结果都需要经过复核，重复实验则需要花费双倍的时间。
但是，目前这种方法也有一定局限性，现在类似的多次核酸检测均为“假阴性”的情况并不罕。PCR检测试剂盒性能如何、采样是否规范有效、实验操作是否标准，每个环节都影响着最终的检测结果。包括：样本质量差，比如口咽等部位的呼吸道样本；样本收集的过早或过晚；没有正确的保存、运输和处理样本；技术本身存在的原因，如病毒变异、PCR抑制等都会对核酸检测造成影响。
胶体金试纸检测法
胶体金试纸，实际上就是用一种胶体形式的金标记生物大分子，并在PVC材质的试纸固定，留上加样孔，设上检测线和质量控制线，这样样品在加样孔加上之后，再滴加几滴液体介质，让液流向试纸另一端的吸水垫进行流动，试纸上进行层析，一般10~15分钟，等试纸上的免疫反应发生之后，就可以看到胶体金聚集的位置上有没有红色条带出现，肉眼可见的，这样就知道检测结果了。
目前在检测新型冠状病毒上已经宣传报道的有两种胶体金试纸，一种是是检测新型冠状病毒的抗原，一种是检测抗体。原理是将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。
原理介绍完了，胶体金的最大优点就是快速，方便。
但是缺点也很明显——通量不高，另外试纸的准确性高度依赖于抗体的特异性，如果抗体质量不好，那很容易有交叉反应，造成误判。另外，人体在接触外来抗原的时候，最早产生的抗体是IgM（Ig就是Immunoglobulin/免疫球蛋白的意思），但是也需要是机体感受病原刺激大约一周以后才出现，产生的时间要晚于病毒复制的时间，所以检测窗口也不如核酸检测。
新冠病毒肺炎诊断试剂检测最新进展
葛均波院士团队联合研发（复旦大学附属中山医院） 新型冠状病毒IgM 抗体快检试剂盒通过注册检验，该检测卡适用于血清或指尖血样本，无需专用的前处理设备。使用方便，即采即测，非专业人员经过简单培训后即可自行完成检测。仅需10μL血清或20μL血，检测时长平均10分钟左右，最短仅需1分钟。此前，联合团队已申报科技部国家重点研发计划应急项目，并申报国家药监局应急审批。
恒温显色试剂盒也相继出炉，该试剂盒在恒温条件下仅需20分钟即可出检测结果，检测样本在反应前后发生颜色改变，操作者可以直接通过肉眼观察，判断检测结果是否为阳性。在无特殊硬件或技术人员条件的单位及工厂、车间、学校均能进行现场检测，也可用于围绕疑似患者的快速诊断和密切接触人群的现场早期筛查。
截止目前，国家药品监督管理局应急审批已通过9个新型冠状病毒检测产品，进一步扩大新型冠状病毒核酸检测试剂供给能力，全力服务疫情防控需要。
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来源：
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