核酸检测？蛋白检测？新冠病毒试剂上百家如何选？

“目前市面上，新冠病毒试剂盒已经有上百家了，究竟应该选哪家？”

“选国药总局已经批准的。”

那么更多问题又来了，比如为什么市面上有的新冠病毒检测试剂盒可以不到半小时甚至几分钟就出结果？市面上这么多种检测试剂，一会儿核酸一会儿蛋白到底哪个检测更靠谱？国家颁布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》中确诊病例的病原学检测到底是指什么？想要搞清楚上述几个问题需要先从病毒感染机体以及机体免疫应答反应的过程开始。

人体共有三道防线，包括了物理防线、非特异性免疫和特异性免疫。病毒入侵人体主要是特异性免疫的过程，简而言之就是病毒进入人体、免疫细胞 (淋巴细胞) 识别并传递信息、免疫细胞分泌相应抗体并攻击病毒，从而起到抵抗病毒作用，而人体免疫应答过程具有时效性，视病毒及被感染机体的双向综合因素，时效长短不一。

人体免疫系统三道防线

以艾滋病检测为例，艾滋病是由于感染人类免疫缺陷病毒 (HIV病毒) 而引起的一种传染病。HIV是一种能攻击人体免疫系统的病毒。它把人体免疫系统中最重要的CD4T淋巴细胞作为主要攻击目标，大量破坏该细胞，使人体丧失免疫功能。

如上图所示，因检测HIV的标志物不同，所以使用的技术原理也不一样，分别包括了检测HIV核酸、抗原、抗体，其窗口期分别为感染后的1周、2周和3周左右。

      HIV免疫诊断检测方法的比较

病毒感染机体最先能检测到的是病毒的核酸。而当病毒的核酸利用人体表达出特征蛋白——即“抗原”时，这需要过一段时间了。而当人体的免疫系统感知到病毒“抗原”这一异物产生免疫应答时，才会产生抗体，所以等能查到抗体的时候，其实已经被感染很久了。

大家可能会问了，既然核酸检测的窗口期更短，那么都用核酸检测不就省事了么？这个问题就相当于在问，“5G更快啊，为什么全球还有人用2G呢？”要知道，任何一种技术的普及都需要一个过程，抗原抗体的检测技术在上个世纪九十年代出现，本世纪初逐步普及，而核酸检测试剂的应用则是在最近的十多年间。无论从人员环境要求、操作难度，还是检测成本来讲，核酸检测都远高于抗原抗体检测，所以至今仍未广泛普及。本次新冠病毒从开始缺试剂，到后来因为取样、操作和试剂盒良莠不齐等原因所造成的假阴性问题也时见一斑。

值得一提的是，窗口期与潜伏期不是一个概念，窗口期定义为从病毒感染人体到感染者血清中的病毒抗体、抗原或核酸等感染标志物能被检测出之前的时期。而当病原微生物入侵人体开始，到能够观察或者感受到症状为止，就叫做潜伏期。简而言之，“窗口期”是感染病毒后不能通过常规检测方法诊断的一段时间，而潜伏期是感染病毒后没有出现临床症状的一段时间。

 新型冠状病毒究竟是如何感染机体的？

人体在最初感染新冠病毒时存在较长的潜伏期 (病毒最初复制阶段，此时并不表现出临床症状)，病毒通过鼻腔和口腔进入到咽喉部，再到气管和支气管，进而到达肺泡，感染者会经历潜伏期、轻度症状、再到严重症状的过程，不同病程阶段以及机体不同部位存在的病毒量有所不同。

新冠病毒感染机体的过程介绍 (源自回形针)

目前临床共识的是，新型冠状病毒感染机体时，肺泡上皮细胞的病毒受体表达占比最高，呼吸道上皮细胞、成纤维细胞、内皮细胞和巨噬细胞等则占比极低。因此，下呼吸道的病毒量明显高于上呼吸道。呼吸道病毒检出可能性又高于血液。此外，在疾病发展过程中，目前有临床实际证据确实粪便也有较大可能出现病毒，因为研究发现消化道细胞也表达有病毒受体，一些患者有腹泻症状，不排除粪-口传播途径。

总之，肺泡灌洗液中最容易检出病毒核酸，其次分别是深咳痰、鼻咽部、口咽部。因为操作的方便性和患者的接受程度，目前临床最常用的标本是口咽部拭子。

新型冠状病毒检测咽拭子自采样方法

 国家指南中新冠病毒确诊病例的病原学证据

 为何是核酸检测？

在国家卫健委2月8日发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》(试行第五版 修正版) 中明确指出确诊病例的病原学证据如下之一：

当前，市面上新冠病毒的检测方法主要分为两大类，一类是基于分子层面的RNA检测，也就是新冠病毒的核酸检测用于病毒感染的确诊依据；还有一类是基于免疫学原理的抗原抗体检测，方法学主要包括了间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验 (enzyme linked immunosorbent assay，简写ELISA) 和胶体金标斑点免疫渗滤法等，这类传统的抗原抗体检测方法在人体免疫系统尚未做出抗体反应的时候是无法检测的。

由于两类方法学检测病毒感染后的窗口期不同，核酸检测的窗口期要明显短于免疫学方法，因此核酸检测可以更早期发现病毒感染。因此若单一采用免疫学方法会错过最初病原微生物核酸检测的黄金窗口期，但是随着病毒感染潜伏期结束，发病患者出现明显的临床症状 (如发热)，伴随机体早期免疫应答反应，此时机体最初产生的抗体 (主要为IgM抗体) 则可通过免疫学方法进行检测到，因此基于免疫学检测试剂主要用于感染后的阳性人群筛查、治疗康复评估等检测依据。

在这特别要强调一点，核酸检测可不是时间越短越好。因为无论是RNA核酸提取，RNA反转录成DNA，还是RNA通过PCR扩增，这每一步都会影响最终的反应结果，相对长一点的检测时间可以确保每一步都更加充分、结果更准确。换言之，核酸检测“唯快不破”是以牺牲检测灵敏度为代价的。

另一个温馨提示，现在很多号称居家就可以自取样检测的新冠病毒检测试纸条，实际上检测的还是抗体。且不说迄今为止尚未有任何一家获国药总局批准，单从技术原理上，等到抗体都能查到是阳性，就意味着病毒感染多时了，所以基本无法起到早期筛查的作用。

附加题：同样是新冠病毒核酸检测试剂，华大为什么选择ORF1ab单独作为新型冠状病毒核酸检测的靶序列？

  结语  

人体免疫应答的过程是具有时效性的，而根据不同检验方法对应的病毒感染的窗口期不同可以选用不同的临床检验方法。感染新冠病毒时存在较长的潜伏期，病毒通过鼻腔和口腔进入到咽喉部，再到气管和支气管，进而到达肺泡，感染者会经历潜伏期、轻度症状、再到严重症状的过程，新冠病毒的核酸检测做为最敏感和特异性的方法可以在黄金窗口期直接锁定病毒，将疫情防控的战线再提前，助力“早知道早干预”的国家新冠病毒预防策略。

新型冠状病毒感染性肺炎来势汹汹，抗“疫”者和时间赛跑，与病毒搏斗，容不得一丝松懈。只有克服对“未知”的恐惧，理性客观分析疫情，不断探索病毒防治的技术与方法，才能真正地打赢这场没有硝烟的战役！