实验专栏丨细胞污染了，诺贝尔奖飞走了，怎么办？
你是不是，曾因为细胞污染影响实验进度而郁闷？
你有没有，实验顺利paper指日可待的关键时刻，细胞忽然污染了？
你是否还记得，河北科技大学韩春雨开创的NgAgo基因编辑技术因为细胞污染竟然重复不出来了？
今天我们就来备战：是不是细胞污染？是哪种细胞污染？如何识别？
一、 细胞污染的识别与解决办法
问题 | 如何识别 | 建议解决方法 |
细菌
| 细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。 | 1）可在培养液中加相应的抗生素处理；2）可以用四环素，庆大霉素，或者链霉素，前两者的工作浓度是50 μg/mL；链霉素的工作浓度是100 μg/mL。3）一旦发生污染，如果细胞不是特别特别珍贵，建议扔了。
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霉菌 | 培养液中慢慢地出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，如同风中柳絮。细胞仍可生长，但时间一长，细胞的活力状态变差。 | 细胞一旦被霉菌污染，很难挽救。用硫酸铜溶液擦拭 CO2 孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体, 可以防止霉菌污染。 |
支原体 | 支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。培养液一般会浑浊。 | ①用MRA处理，每4天换一次液,连续处理15天以确保细胞纯洁健康，效果好；②用清洗纯化法清除支原体污染的方法；③药物辅助加温处理；④使用支原体特异性血清 |
黑胶虫 | 低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液不浑。 | 一般不会太影响，细胞还是可以用的，如果太多了，可能会影响实验结果，可增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。 |
真菌污染 | 一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，镜下有时候象丝状，有时候象珊瑚状。慢慢地会长出很细的黑色丝状物。 | 真菌生长的比较慢，不容易被发现，一旦发现也很难救活了，建议扔了，然后彻底消毒灭菌培养间。 |
原虫污染 | 培养液轻微浑浊，细小的点状物多，轻微活动，细胞繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。 | 配液消毒问题、操作问题、环境问题等等都可能。需去测试取培养基至培养瓶中（不加细胞），37 度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题。 |
二、 细胞污染的预防
预防是防止细胞培养过程中发生污染的最好办法。只有预防工作做在前，才能将发生污染的可能性降到最小程度。一般预防可从以下几方面着手：
1、添加抗生素
2、从物品、用品消毒灭菌着手
细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。
3、从操作者做起
(1)进无菌室前要用肥皂洗手，按规定穿隔离衣。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。
(2)操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。
(3)操作时要常更换吸管，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕用消毒水浸泡的纱布擦台面。
4、防止细胞交叉污染
在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分。
在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。细胞一旦购置或从别处引入，均应及早留种冻存，一旦发生污染可重新复苏培养。
5、无菌室的彻底消毒
1) 0.1%新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室;
2)甲醛熏蒸法：甲醛是一种广谱灭菌剂菌，其水溶液和气休对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。
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