20221104【回放】-康俊炎丨FXR1液液相分离激活mRNA翻译保障精子形成
精选提问：
1.FXR1所影响的target mRNA的翻译，和不育表型是否存在因果关系，是否是影响了哪些明确的mRNA的翻译，从而导致不育。
2.体外纯化出来的蛋白是如何标记上荧光的，是不是荧光融合蛋白。
3.为什么突变的时候会选择突变为脯氨酸呢？一般不是首选突变为丙氨酸？
4.在细胞内，FXR1发生相分离是否也依赖与RNA结合，如果与RNA不结合，FXR1的相分离如何让？
5. 请问基于你们的研究，对于未来在治疗临床男性不育的患者，可能会有什么应用呢？
6.你好请问筛选的的上调基因有几个比Fxr1变化更大，那几个有关注到么？还有就是注意到您体外实验加了10%Peg，如果不加会怎样？还有Rna促进相变的实验有用过random Rna么？
7.康博士您好！利用大肠杆菌体外表达FXR1能获得全长可溶性蛋白吗？谢谢！
8.非常精彩的报告，感谢康博士。想问下FXR1发生相分离是否依赖于其他相互作用蛋白？
9.在细胞内，FXR1这个突变位点不发生相分离，也可能这个突变位点破坏了与别的蛋白结合，导致相分离能力下降。
10.非常精彩的报告，感谢康博士。想问一下，体外相分离实验怎么选择加入的RNA？谢谢。
11.老师我还有一个问题，您刚刚说在体外的相分离不依赖于其他蛋白，但是有没有可能在体内会有其他蛋白能够帮助更容易发生相分离呢？
12.FXR1是否特异性识别并翻译靶mRNA？
13.如何找到F351P这个关键位点的 还有为什么要加FUS -IDR这个区域，这个区域本身相分离会不会影响LLPS？
14.FXR!有报道基因变异导致无精症状吗？
15.可以详细介绍一下351位点如何找到吗？
答：二分法，几个大的功能域筛选后不断二分。
16.请问可以在体内直观的观察到蛋白质相分离的发生过程吗？
答：细胞系可以；精子细胞不能体外培养，所以不行。
17.发生相分离的蛋白做frap 一定会恢复吗？
答：恢复效率会有不同。
18.请问最开始细胞内看到FXR1形成颗粒状是免疫荧光下看到的吗？
答：是的。
19.请问FXR1蛋白有多大？体外纯化的是全长FXR1蛋白吗？
答：70 kDa左右，是全长。
20.点突变的小鼠是可以存活的吗？
答：条件型点突变，具体交配策略比较复杂，可参见paper的补充材料最后一个figure。
21.请问FXR1和fmr1什么关系，fmr1是否参与它的作用？
答：同属一个蛋白家族，在小鼠生精细胞中，二者表达窗口不同。
22.请问突变体的融合蛋白为什么能够回复相分离?
答：借助了FUS蛋白的IDR区域，其具有相分离能力。
23.会不会在其他类型组织中也有类似的机制？所以突变会影响其他器官？
答：存在这种可能性。但本工作中采用条件型点突变策略，所以未对其他器官发育情况做检测。
24.FXR1为何有很多剪切体？它们的功能分别是什么呢？
答：现有文献指出可能参与某些特定生物学进程调控，如肌细胞分化，但具体机制尚未解析。
25.fxr1这个抗体，市面上的质量差异蛮大，康博士比较推荐哪个厂家？
答：可能要具体看实验目的，我们采用了PTG和Santa cruz两家的。
26.是否有做过回补实验 将FBX1再次回补到小鼠体内挽救无精症状？
答：慢病毒转导就是您提到的实验。
27.FXR1在胚胎发育过程中也有功能吗？
答：根据全身敲除小鼠表型反推，可能在晚期较为重要，但未被证实。
28.怎么克服发生相分离的蛋白在纯化时高度聚集状态？
答：这个问题没有遇到，所以无法给出建议。
29.请问细胞内FXR1形成颗粒那个实验，是直接一抗二抗染色就能看见吗？
答：是的。
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演讲人介绍：
康俊炎：2018年1月于中国科学院生化细胞所获得博士学位，随后留所从事博士后研究工作至今。期间，获得博新计划、博后面上和上海市“超级博士后”等资助。研究工作以小鼠为模型，结合临床案例，探究RNA结合蛋白及其生物大分子颗粒对基因的时空表达调控。第一作者或共同第一作者文章发表于Science, Cell, Cell Research, Development等。
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