20230317【回放】-肖乐丨NLRP3炎性小体的激活组装机制
精选提问：
1.您好，请问nigericin处理的步骤对于得到最终的结构是必须的吗？
2.能否删掉抑制结构实现自主活化？
3.钾离子外流激活 nlrp3 炎症小 461体组装在结构上有相关的研究吗?
4.您好，请问在immunity杂志上发表的hipsc诱导的巨噬细胞活化不需要nek7，这个您怎么看？
5.pyd 结构域在cage里面是不是还是看不清楚结构？
6.电镜是否观测到活性NLRP3的单体？
7.老师您好有部分文献报道ox-mtDNA是NLRP3激活的配体，想请教您如何看待ox-mtDNA在NLRP3激活中的作用和重要性？
8.什么蛋白催化ATP和ADP转换？
9.肖博士您好，我想请问NLRP3的激活需要ATP的水解吗？还是只要结合改变构象就可以？谢谢。
10.请问用flag一步亲和之后就能看到很好的nlrp3和nek7的主条带吗？
11.什么情况下会有NEK7 independent激活呢？
12.为什么293F表达的时候要额外补充KCl？
13.请问纯化出的抑制态NLRP3加入ATP会有aggregate的现象吗？蛋白会沉吗？谢谢。
14.有文献报道NLRP3是结合的是内体上的PI4P，而不是dTGN,您如何看待？
15.您好，想问一下为什么show出来的电镜图有些nlrp3有filament 有些没有。
16.请问分子筛buffer里面需要添加atpγs和Mg离子吗？
17.十一聚体的寡聚和十聚体的寡聚是有蛋白相互作用的不同区别吗？因为十一聚体并没有报道。
18.不添加atpγS的nlrp3和nek7的complex能与asc形成filament吗？
19.十一聚体的组成单体和十聚体是一样的吗？
20.肖博士您好，目前您提出的NLRP3炎症小体的激活模型是ATP处理解析的，对于nigericin刺激时您觉得这个激活过程和ATP一样吗？
21.你好，请问NLRP3 在未受到刺激时在细胞中弥散分布，这种情况下NLRP3 是单体还是寡聚化的？
22.旋转角度一样的活性单体为什么寡聚不同的结构相互作用也一样？
23.一定要寡聚才能激活吗？单体可以激活吗？
24.nlrp3 炎性小体激活的时候能在荧光显微镜下看到炎症小体的组装 473 固定位吗?
25.NLRP3主要定位于哪种神经细胞？
26.NLRP3的组装激活可以在in vitro 条件下实现吗？目前的化合物筛选都是在细胞水平的刺激条件下激活NLRP3炎症小体，有可能建立分子水平的NLRP3激活assay吗？
27.19年的非活性态NLRP3-NEK7单体在您提出的机理里似乎并不存在。
28.之前我们实验室两个人纯化flag标签的蛋白，只能洗脱下来很小部分，想问肖博士您用的flag 标签 洗脱效率如何，洗脱buffer 成分？
29.Nlrp3的研究必须要以巨噬细胞为细胞模型吗？还是其他细胞系也可以？nlrp3炎性小体激活的时候可以在荧光显微镜下观察到炎症小体组装的共定位吗？
30.那如何看现目前有些文章以非巨噬细胞，非单核细胞为模型研究nlrp3炎性小体？
31.能否直接开发caspase1的抑制剂用于抑制nlrp3活化？
32.有文献报道，氯离子外流可以导致无活性 asc 寡聚体的形成，但是我做了好多次，都无法重复，你们如何理解？
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演讲人介绍：
肖乐：2020年于中国科学院生物物理研究所获得博士学位，现为哈佛医学院和波士顿儿童医院博士后。主要研究先天性免疫中炎性小体的工作机制，研究成果发表于Nature。
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