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几步就能扯上明星分子的蛋白互作连连看

2015-07-07 右哉 实验万事屋

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有的小盆友,还是没有想通,要怎么样才能把自己的基因扯上明星分子。


这种间接作用靠不靠谱啊?或者说这种相关性能说明有相互作用么?或者说,他们直接有没有直接相关性呢?


好吧,大家要知道的是,大多数的蛋白相互之间是有过验证的相互作用的(比如用双杂,coIP,FRET等等,要了解双杂的点这里 还有这里)。从这样角度来看,也就是说,蛋白A和蛋白B之间,多多少少会有间接关系……听上去很神奇是不?换种说法,就是所有的基因都像是人和人之间的联系一样,而根据“人际六层间隔理论”(不明白这个的),也就是说,蛋白间的相互作用关系,最多就隔了6个蛋白……


不信么?好吧,我们做一个这样的蛋白质互作分析。呃,这需要用到一个软件,名字叫做“Osprey”,是一个蛋白质相互作用网络可视化系统。是加拿大多伦多大学一个生物信息学研究组开发的,目的在于更好的研究蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction networks)和蛋白质复合物。软件本身和(BIND,GRID)数据库整合,涉及到蛋白质、核酸序列又和GenBank交叉链接。(这些都是我之间度娘来的,其实就是告诉你这玩意是一个分析蛋白互作的软件,但是要有JAVA才能用)。要下载就识别下面的二维码:



这玩意装起来挺复杂,为啥,是因为装好之后它就会停在一个界面不动,其实是已经安装完了。装好之后安装目录下面会有一个“Osprey.jar”的文件,直接点开就可以用了。



好吧,界面大概就是这样的。我们找点啥相关性呢?呃,我想了半天,想看看β-Actin和E-Cadherin之间的关系,想想内参和EMT关系应该也不大吧。于是我就愉快地来找关系了,首先找ACTB(也就是β-Actin,要是还不懂基因名,那就点这里)。



OK了,输入了,但是,输入E-Cadherin出了问题了。E-Cadherin的基因名是CDH1,但是输入了CDH1,却被告知木有这个基因。



次奥,不可能吧,这么明星的分子居然没有?但是基因名上有一个ORF的编号,是EG开头的。这不就是Gene ID么?那我们就输入E-Cadherin的ID看看。先到NCBI上找到E-Cadherin的ID是多少。



按照ID,输入“EG999”即可。



然后选定这俩蛋白,分别都加上他们的互作蛋白进去,就OK了。



一目了然了,其实β-Actin和E-Cadherin是有关联的。



而且这种关联仅仅间隔了一个蛋白而已。



啥?因为实验方法太多,都是通过不同的实验汇集来的,只相信双杂结果么?好的,我们就把其他的互作的实验全都砍掉,只留下酵母双杂获得的互作结果。



这样的话貌似没啥关系了……


但是我们继续深入挖掘,选定所有的这些分子,插入这些分子的已知互作蛋白,这样出现的分子量就成数量级增多了。



在这些分子中,我们理清楚所有的蛋白,结果可以看到,即使只有双杂结果明确有互作的分子,β-Actin和E-Cadherin之间也就只隔了5个蛋白而已。



…华丽丽的分割线…


李莫愁博士:有的童鞋要问了,为啥我要把这些蛋白和明星分子(不知道啥是明星分子就点这里)给联系起来啊?擦,请好好看帖好么?(点这里点这里)其实做间接的分子机制的话,没有什么比找到一个和表型相关的明星分子来的更简单粗暴了。要不大家也试试看?好啦,今天就策到这里吧……


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