【非瘟讲堂/第三堂】非洲猪瘟科学采样系列之猪只采样篇

邦博士

Dr.YEBIO

我国的非洲猪瘟疫情自2018年报道至今，国内非洲猪瘟防控工作始终未曾懈怠。在临床防控过程中，非洲猪瘟实验室检测工作至关重要，准确的检测结果对非洲猪瘟疫情的早期发现、快速处理及后期复养均可提供科学指导。那么如何才能做到科学采样？本期【非瘟讲堂】将和大家一起探讨。

邦博士说

非洲猪瘟实验室检测工作中，检测对象科学采样是前提，下表1是针对猪群推荐的采样方法，根据不同采样对象选择合理的采样方法。

表1 常用采样方法推荐表

本篇为猪只采样篇，介绍非洲猪瘟防控中4种常用猪只采样方法，分别为口咽拭子采样、口腔液采样、尾根/阴户血拭子采样及淋巴组织采样，具体准备工作及操作方法参考下文。

必需物品套装

一次性隔离服、雨靴、一次性PE手套、一次性鞋套、一次性医用口罩、75%酒精消毒棉球或碘伏等消毒液、信息登记表、记号笔、冰袋、保温箱。

一

口咽拭子采样操作SOP

（一）物品准备

必需物品套装、专用口咽拭子（长度＞50cm）或自制拭子（输精管和无菌纱布制作）、一次性长臂手套、50ml收集管、自封袋、核酸保护液。

（二）具体步骤

1	准备工作：采样前根据采样目的制定采样方案和路线，带足所需物品，减少盲目走动。采样人穿戴好隔离服、雨靴及口罩，先佩戴一次性乳胶手套后，再戴一次性长臂手套，以便及时更换；
2	使用专用口咽拭子（长度＞50cm），或者自制口咽拭子（具体可参考下图），拭子斜向上插入口腔深部近咽喉处，近扁桃体周围反复摩擦取样，待彻底湿润后取出（以清亮粘稠状液体为准）；
3	将拭子头部掰断或剪断，（自制拭子放入自封袋内取出纱布，挤压纱布，把液体转移到2ml离心管里）。更换新的一次性长臂手套，再对下一头猪采样；
4	记录送检：在管体表面做好信息记录，相应信息做好登记，冷藏保存尽快送检；
5	废物处理：每次采样后立即更换手套，避免交叉污染，废弃物品及时无害化处理；
6	消毒：采样后安排人员对采样路线的道路及周边区域进行消毒处理。

（三）注意事项

1	采取不保定猪只采样，降低采样过程的散毒风险；
2	建议在饲喂前采样，或饲喂结束2小时后采集，避免饲料残渣影响检测结果；
3	3小时内可检测无需加核酸保护液，若不能则务必加入，送检过程避免反复冻融；
4	对无法采集口咽拭子的猪只，可采集肛拭子、食槽、水槽及前驱区域的环境样本。

自制口咽拭子，咽拭子头部大小可根据猪只大小确定，参考如图示：

二

口腔液采样操作SOP

（一）物品准备

必需物品套装、无菌棉绳（禁止使用消毒药浸泡）、核酸保护液、自封袋。

（二）具体步骤

1	准备工作：采样前根据采样目的制定采样方案和路线，带足所需物品，减少盲目走动。采样人穿戴好隔离服、口罩、雨靴，先佩戴一次性乳胶手套后，再戴一次性PE手套，以便及时更换；然后对道路、采样区域周边喷洒消毒剂后再采样；
2	将采样专用无菌棉绳一端打结挂到猪栏中猪只易接触处（该处远离水槽和食槽），绳子下端距离地面高度与猪肩胛骨同高，以便猪只能咬到棉绳；采样密度为每10头猪一个棉绳；
3	绳子悬挂时间建议为30~40分钟，最大程度确保同一栏中80%以上猪只咀嚼过棉绳；
4	摘取棉绳后，将棉绳装入自封袋密封（可事先存有1~2ml核酸保护液），取回；对走过的道路区域进行消毒药喷洒消毒。
5	记录送检：在自封袋表面做好信息记录，相应信息做好登记，冷藏保存尽快送检；
6	废物处理：每次采样后立即更换手套，避免交叉污染，废弃物品及时无害化处理；
7	消毒：采样后安排人员对采样路线的道路及周边区域进行消毒处理。

（三）注意事项

1	根据猪群数量放置棉绳（10头/根），不可交叉；
2	建议在早上饲喂前采样，或饲喂结束2小时后采集唾液，避免饲料残渣影响检测结果；
3	收集口腔液前需观察棉绳湿润度，只有在充分湿润后方可收集；
4	3小时内可检测无需加核酸保护液，若不能则务必加入，送检过程避免反复冻融；
5	唾液的收集在实验室或在偏僻的、易于消毒的地方进行，之后对分样区域进行消毒，禁止在猪舍内收集，防止污染；
6	个别发病猪精神萎靡，不会啃咬棉绳，可单独采集咽拭子/血拭子和接触的环境样本送检。

三

尾根/阴户血拭子采样操作SOP

（一）物品准备

必需物品套装、样品保存管、一次性采血针、生理盐水。

（二）具体步骤

1	准备工作：采样前根据采样目的制定采样方案和路线，带足所需物品，减少盲目走动。采样人穿戴好隔离服、雨靴及口罩，先佩戴一次性乳胶手套后，再戴一次性PE手套，以便及时更换；然后对采样区域周边喷洒消毒剂后再采样；
2	在尾根或阴户用一次性采血针刺破，挤出适量血液，用无菌棉拭子吸血后，消毒棉球按压出血处30秒，止血消毒处理；
3	将血拭子头部折断放入样品保存管中（含1~1.5ml生理盐水）；
4	记录送检：在样品保存管表面做好信息记录，相应信息做好登记，冷藏保存尽快送检；
5	废物处理：每次采样后立即更换手套，避免交叉污染，废弃物品及时无害化处理；
6	消毒：采样后安排人员对采样路线的道路及周边区域进行消毒处理。

（三）注意事项

1	血拭子通常采集尾根或阴户拭子，耳缘血拭子且易导致交叉污染，不建议采用；
2	阳性个体血中病毒含量较高，风险较大，针刺前后做好部位清理及消毒处理。

四

淋巴组织采样操作SOP

（一）物品准备

必需物品套装、生理盐水，解剖刀、死猪专用处理袋、样品保存管。

（二）具体步骤

1	采样前根据采样目的制定采样方案和路线，带足所需物品，减少盲目走动。采样人穿戴好隔离服、雨靴及口罩，先佩戴一次性乳胶手套后，再戴一次性PE手套，以便及时更换；然后对采样区域周边喷洒消毒剂后再采样；
2	淋巴组织采样通常指腹股沟淋巴结的采样，一般针对死亡猪只采样。首先将死猪专用处理袋包裹转移至无害化处理区，由采样人员使用解剖刀在猪腹股沟处取部分淋巴组织，置于样品保存管中（含0.5~1ml生理盐水），之后密封袋口及时对死猪无害化处理；
3	记录送检：在样品保存管表面做好信息记录，相应信息做好登记，冷藏保存尽快送检；
4	废物处理：每次采样后立即更换手套，避免交叉污染，废弃物品及时无害化处理；
5	消毒：采样后安排人员对采样路线的道路及周边区域进行消毒处理。

（三）注意事项

1	一头猪一把解剖刀，用后统一消毒灭菌；
2	病死猪采样在处理袋中进行，防止液体流出造成污染。

以上为猪只采样的准备工作、具体操作步骤及相关注意事项。针对不同栏位、不同群体及不同健康度的猪只建议选择科学的采样方法，猪只科学采样是非洲猪瘟早期发现、快速排查及准确诊断的前提，也是猪场实现精准剔除的重要环节及工作。

部分图片：已取得新媒体商用授权

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