液相常见故障之【色谱峰异常】| 实验小课堂

在第一期的实验小课堂里，我们与大家分享了有关灵敏度下降的处理方法（点击可复习查看）。第二节小课堂今天开课，让我们来谈谈色谱峰异常问题。

液相色谱峰不正常的来源很多种，但只要学会分类并逐一排查，就能找到合适的解决方法。我们建议大家遇到问题时沉着冷静，仔细观察色谱图确认问题，再根据不同分类进行后续处理。

常见的色谱峰问题主要有以下三类：

1. 色谱峰峰形异常

例如：负峰，宽峰，肩峰，双峰，峰形不对称等。

2. 色谱图中峰个数异常

例如：色谱图未出峰，出峰超预想范围。

3. 色谱峰保留时间异常

例如：保留时间漂移，保留时间增加或减少。

了解大致分类后，我们下面就各个问题进行逐一分析及经验分享。

1色谱峰峰形异常

现象：峰拖尾/峰后面有鼓包

可能原因：

• 柱后有死体积

• 色谱柱问题（如填料塌陷）

现象：峰展宽且拖尾

可能原因：

• 色谱柱入口筛板部分阻塞

• 在线过滤器污染

• 保护柱污染

现象：峰展宽可能原因：

• 管路内径/过长的管线

• 体积过载

• 质量过载

现象：所有色谱峰都变形

可能原因：

• 溶解样品的溶剂不当

现象：峰前沿或峰分叉

可能原因：

• 溶剂问题

• 进样量太大

• 色谱柱前面接头有死体积

• 色谱柱或保护柱问题

• 化合物的性质

• 溶剂问题

现象：碱性物质峰拖尾

可能原因：

• 色谱柱上残留硅醇羟基

• pH影响

现象：所有色谱峰均为负峰

可能原因：

• 光学检测器尚未达到平衡

• 信号电缆接反

• 检测器输出极性设置颠倒

现象：一个或几个色谱峰为负峰

可能原因：

• 流动相吸收本底高

• 进样过程进了空气

• 离子对分离中的系统峰

• 样品组分的吸收低于流动相

现象：所有色谱峰均为宽峰

可能原因：

• 系统未平衡或未达到化学平衡

• 接头未接好产生了死体积

• 溶样的溶剂比流动相强很多

• 色谱柱类型或尺寸不正确

• 色谱柱或保护柱被污染或降级

• 温度变化对色谱柱的影响

现象：较早洗脱的峰呈宽峰

可能原因：

• 进样体积过大或样品浓度太高

• 进样器有问题,定量环（Loop）大小不合适

• 在线过滤器、保护柱、色谱柱或管路堵塞

• 管路问题：内径不对或切管不正确

• 管路连接问题：接头或锥箍不正确

• 检测器时间常数不正确

2色谱峰个数异常

现象：色谱图未出峰

可能原因：

• 进样问题 – 未进样或样品分解

• 流动相问题 – 泵未输液或流动相不正确

• 检测器 – 设置不正确

现象：出峰比预想的少

可能原因：

• 样品分解

• 色谱柱柱效丧失

• 用错流动相

• 梯度洗脱平衡时间不足

现象：出峰比预想的多

可能原因：

• 样品分解或制样时导入了杂质

• 流动相被污染，或用错流动相

• 流动相中含有稳定剂或稳定剂发生变化

• 前次进样的后流出物（某些t_R值特别大的组分）

• 进样器被污染，洗针系统出问题或注射器脏

• 保护柱脏，色谱柱被污染，分辨率下降

3色谱峰保留时间问题

现象：保留时间漂移

可能原因：

• 系统不稳定或未达化学平衡

• 泵压力不稳（泵头里有气泡）

• 进样体积过大或样品浓度过大

• 温度波动

• 流动相混合不均匀

• 色谱柱被污染

• 系统渗漏

现象：保留时间改变到一个新的恒定值

可能原因：

• 流动相不正确或其组成不正确

• 泵流速变化

• 实际输液的流速不正确（泵失灵或故障）

• 环境温度变化，柱温不正确

• 色谱柱尺寸或类型不正确

• 色谱柱被污染

• 流动相含有稳定剂或稳定剂发生变化

• 输液系统的梯度滞后体积不正确

面对液相色谱峰的问题，建议各位先进行问题归类，再对应采取不同的解决办法。以上的汇总希望能给到大家一些新的思路和见解，以后再遇到类似问题就能不慌不乱了。

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