（文章篇）S4E09: 做microRNA研究，提升文章档次的三个锦囊。
大家好，今天我们介绍这篇文章：MicroRNA-143 Activation Regulates Smooth Muscle and Endothelial Cell Crosstalk in Pulmonary Arterial Hypertension.Circ Res（IF 11.0）. 2015 Oct 23;117(10):870-83. （全文下载链接：http://pan.baidu.com/s/1nvkw6ed 密码：ytw9），并在文后总结部分给大家提升文章档次的三个锦囊。
首先我们看文章的机制图：
在PASMC（肺动脉平滑肌细胞）中，肺动脉高压发生相关信号通路通过激活miR-143/145启动子活性调节miR-143/145的表达。 在血管重构过程准哦功能，MiR-143-3p作为旁分泌信号来介导细胞运动、调控凋亡。在PAH（肺动脉高压）进展过程中，PASMC分泌包含miR-143-3p的外泌体，并被转运到PAEC（肺动脉内皮细胞）诱导细胞的运动和血管生成。
这篇文章的内容包括三部分：
1. MiR-143在PAH动物模型、病人样本中高表达，而且miR-143/145的表达激活是由于其启动子上游区域含PAH相关信号通路中转录因子结合位点所导致；
2. MiR-143体外功能：影响PASMC的运动和凋亡；而MiR-143敲除或者抑制后改良了缺氧导致的PAH表型；
3. MiR-143通过PASMC分泌的外泌体传递到PAEC，并调节PAEC的运动和血管形成能力。
我们先看一下PASMC与PAEC的共培养体系（与Transwell非常像）：
作者分别用共培养体系和来源于PASMC的培养基，来评估含MiR-143的外泌体从PASMC分泌到PAEC，并对PAEC运动能力的影响。
然后评估PASMC来源的外泌体中miR143对PAEC运动和血管形成能力的影响。
最后总结一下，这篇文章有几个关键词：microRNA；外泌体；肺高血压；转录调节，这篇文章之所以能发11分，我们有哪些亮点可供参考，以帮我们提升文章的档次：
不走下游走上游：作者选microRNA143/145簇（cluster）作为关键分子，对microRNA的经典套路来说，一般会从下游着手，比如预测靶基因，然后在PASMC中验证microRNA143/145在PASMC中的功能（运动、凋亡），然后通过荧光素酶报告基因实验证明microRNA143/145对靶基因的调控；而作者呢，则反其道而行之，研究microRNA上游的因子对表达的调控，此为亮点一；当然，对microRNA启动子和转录因子结合位点的分析验证、以及对甲基化等其他可能调控microRNA表达因素的排除也是我们学习的地方；
引入热点：外泌体，在通过PASMC验证了microRNA143的功能后，作者进一步研究了外泌体中的microRNA143在PASMC与PAEC细胞通讯中的作用，在对外泌体进行大小、电镜、Marker等方式进行鉴定后，通过共培养体系、条件性培养基两方面验证外泌体在PASMC与PAEC细胞通讯中的作用，实验设计和方法都很经典，所以做microRNA研究的小伙伴，除了常规实验外，可以考虑外泌体作为加分点哦！
体内实验表型逆转：考虑到动物实验的复杂性，体外细胞实验的表型有一定概率在动物实验难以重复，不可否认，作者通过体内动物模型实验对microRNA143的进行了干预，并逆转了PH的表型，这是本文加分的第三点。
好了，今天就到这里了，有朋友问聚类热图的做法，我们请依凡在f副本S4E10教大家怎么用R绘制聚类图，敬请关注，谢谢！
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