2021年7月30-31日，在《第三届东方分子诊断学术会议》“感染性疾病分子诊断论坛”上，现场发布了《病原体核酸即时检测（POCT）质量管理要求专家共识》，该《共识》由上海市医学会分子诊断专科分会、上海市医学会检验医学专科分会、上海市微生物学会临床微生物学专业委员会、上海市临床检验中心制定。
主要内容一览
1主要宗旨
鉴于分子诊断的复杂性和感染因子的生物安全要求，病原体核酸POCT质量管理要求尚无章可循。本《共识》立足当前全球范围的感染性疾病谱，从应用场景、生物安全、人员资质、性能验证、质量控制、结果报告等全流程运行管理进行阐述，以期促进该技术在公共卫生防御和医院感染管理中的合理应用和健康发展。
2应用场景实验室长期以来一直使用POCT检测病原体的抗原或抗体，检测灵敏度和特异性低于分子检测技术。应进行病原体核酸检测，主要应用于发热门诊、急诊、儿科和某些特定病区实验室。与普通理化指标POCT检测不同的是，病原体核酸POCT首先需评估生物因子的危害程度，在符合生物安全要求的条件下方可开展工作。根据现阶段技术条件以及未来技术发展趋势，不同病原体核酸POCT检测技术的主要应用场景有所不同（推荐建议见表1）。 尽管POCT的性质决定其可以在非临床检验中心（医学检验科）实验室开展，鉴于核酸检测的技术特性，仍需具有临床检验资质的检验技术人员培训合格后方可进行检测。
表1 病原体核酸POCT应用场景
3生物安全管理应在符合国家和地方生物安全法规以及医院感染管理条例的前提下开展病原体核酸POCT。分子POCT系统为整合一体化封闭系统，可有效防止生物样本及其遗传物质污染环境、遗传物质污染环境，但标本采集期间以及样本加入试剂卡/盒环节，会与患者和样本直接接触，仍存在病原体暴露风险。
除按照产品说明书推荐的方式操作患者标本，以降低气溶胶形成、溢出或暴露的风险外，检测区域至少具备有生物安全柜和高压灭菌器等生物安全二级实验室必须的设备，保证有传染风险的标本前处理的生物安全。
4标本采集和预处理病原体核酸POCT设备和配套试剂都必须获得NMPA批准后方可应用于临床。
不推荐使用非配套采样器械。特殊情况下如需使用非厂家检测试剂配套的标本采样容器及保存液，需在标本采集前对采样容器及保存液进行性能确认。
标本采集方法和标本类型的选择、稳定性、运输温度和时间、接收标准、保存条件等应严格遵循产品说明书规定，采集后按照说明书检测。
表2. 临床常见标本类型及其检验目的
对POCT检测系统进行独立的性能验证，以证实检测程序性能与其所声明性能指标相符。不同项目性能验证参数有所侧重。定性检测项目需验证的性能指标至少包括符合率、精密度（重复性和再现性）和检出限等；定量检测项目需验证的性能指标至少包括正确度、精密度、线性区间、定量限等。对于多重病原体核酸检测，宜尽量覆盖常见病原体种类及基因型别。1）符合率：选取阴性样本至少5例，阳性样本（应包含弱阳性样本）一般不少于10例。若无法获得足量阳性样本，可使用人工制备模拟样本；若弱阳性样本不好获取，可用适当稀释阳性样本获得类似效果。阴性样本中应包含与检测对象核酸序列具有同源性、易引起相同或相似临床症状的样本。按照检测程序进行检测，将检测结果与已知检测结果进行比对，计算符合率。符合率≥90%为验证通过。
2）精密度（重复性和再现性）：新鲜或冻存的阴性和弱阳性样本各1份。若无法获得足量临床阳性样本，可适当稀释阳性样本或使用人工制备模拟样本。按照检测程序每天检测3次，连续检测3天（若多人操作应更换操作人员）；对于多通道POCT设备，每个检测通道至少检测一次。阴性和弱阳性样本检测结果应完全一致。
3）检出限：将一份定值标准物质（如国际参考品、国家参考品、厂家参考品等）梯度稀释至厂家声明的检出限浓度，可重复测定5次或在不同批内对该浓度样本进行20次重复测定（如测定5天，每天测定4份样本）。如果是5次重复检测，必须100%检出靶核酸；如果是20次检测，必须检出至少18次靶核酸。实验室应建立并实施涉及检测全过程的标准操作程序，包括但不限于标本采集、运送、保存，标本接收和预处理、检测操作和复检流程、结果报告和解释、仪器设备维护、性能验证、室内质量控制和室间质评等，有条件的实验室可建立个体化质量控制计划（IQCP）。实验室使用多台或多个品牌POCT仪器时，在常规运行中，要遵循医院POCT管理文件规定进行定期仪器间比对。POCT检测通常每个样品都包含一个内部对照（内标），而外部质控品（应包括阳性和阴性）作为单独的样品运行。内标在控表明正确提取了患者样本，这是获得正确结果的必要步骤。外部质控品则评估检测系统是否提供正确结果。完整的室内质控程序可以控制检测过程、评价检测系统性能，提供质量保证。室内质控品应设置阴性质控品（监测污染）和弱阳性质控品（防止假阴性）。首次使用时应先检测弱阳性质控品和阴性质控品，质控合格后开始临床样本检测。之后宜每隔24小时或者50个样本（根据工作场所标本量情况设定），需再次检测弱阳性和阴性质控品。对于多重核酸检测系统，建议在一个批次试剂检测周期内尽可能覆盖常见病原体种类及型别。定性检测项目的质控数据判断需要符合预期阴阳性结果；定量检测项目弱阳性质控结果建议采用Westgard多规则进行判定。质控结果在控才能发出报告。应制定程序对失控进行分析并采取相应措施，应检查失控对之前患者样本检测结果的影响。当POCT系统运行良好、检测结果后台数据（包括内参以及待检病原）无误、室内质控在控时，即是有效结果，可按设备提供的阳性或阴性结果进行报告。部分POCT试剂会产生高致病性病原微生物阳性结果，应核查后台数据后第一时间将结果报告送检医生；或会产生耐药基因阳性结果及高毒性菌株或毒株，需要结合相应病原的鉴定结果对耐药基因进行判读。检测灵敏度比免疫POCT高，加上非分子检测人员的使用会带来检测失败和环境交叉污染的风险。仪器平台通常不与实验室信息系统连接，增加手工录入错误风险。目前病原体核酸POCT试剂比常规荧光定量PCR检测和基于抗原的检测更为昂贵。
平台检测通量较低，不能有效满足大型医院的病原体检测通量需求。
来源；万孚倍特、《病原体核酸即时检测（POCT）质量管理要求专家共识》供稿：Joy | 编辑：As素 | 校对：Tiki | 责编：木霖森声明：①本公众号原创发表的文章，任何个人、媒体、网站如需转载，须在文首位置注明转自“CACLP体外诊断资讯”。②媒体合作：021-52258212
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