AnnexinV方法适合所有细胞吗?Annexin V测凋亡的常见问题(2)
你在应用Annexin V染色测凋亡的时候,是否有遇到一些让你疑惑的问题?例如昨天我们讲授过的为什么要把EDTA洗去?为什么正常组细胞要分出200μl体积不染色?AnnexinV-PI+象限究竟是什么细胞?
今天我们将会对Annexin V测凋亡的其他常见的问题进行讲诉,喜欢的亲可以转发给你的朋友同学们!
1凋亡结果怎样可以接受?
问&答-------------------------------------------
一般,正常细胞的早期凋亡率为约5%左右,经凋亡诱导的细胞的早期凋亡率明显上升,有的20-30%,有的30-40%,不同类型的细胞不同;即使同种细胞,前后两次实验的细胞状态不一致时,凋亡率也会不一致,通常三次实验后做统计学分析。
2样品需如何注意以减少检测误差?
问&答-------------------------------------------
为了减少误差,须注意细胞状态、消化方法、试剂选择、吹打频率、离心转速、及时检测等等。
3AnnexinV方法适合所有细胞吗?
问&答-------------------------------------------
最适合悬浮培养的细胞,对于贴壁生长的细胞,最好用不含EDTA的胰酶消化收集,且消化时间不易过长。可将胰酶消化后的细胞保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤。
某些细胞的细胞膜外表面带有大量的PS,因而也不能使用该方法(比如巨核细胞、血小板、某些骨髓系细胞)。
4GFP转染的细胞可以用Annexin V法吗?
问&答-------------------------------------------
Annexin V-FITC不能用,可用Annexin V-APC
要分出200μl体积不染色的细胞:未转染的和转染的分别都要。
是否存在自发荧光的细胞或药物?如是,检测时需要注意排除其影响,如实在无法排除,建议采用其它方法检测。
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