天天都在用！您知道丙型肝炎是如何被发现的吗？

问：

犹如这张化验单，临床天天都在看，你知道其中的具体意思吗？丙肝，什么来历？

1974年，纽约血液中心的Prince及其同事，首先报道了除乙型肝炎病毒（HBV)外，还有另一种因子能引起输血后肝炎。

随后Feinstone等也相继报道了22个患者，其输血后肝炎也不是由甲型肝炎病毒（HAV)或HBV引起。

这样，大多数输血后肝炎与HAV和HBV无关就在两个独立的研究中得到证明，当时，《Lancet》杂志有篇文章在总结这些发现时使用了非甲非乙型 ( non A,non B)这一术语。

1975年，Alter等提出80%～90%的患者输血后肝炎均为非甲非乙型肝炎(NANBH )。

1976年，Koretz又指出约60%的NANBH具有慢性化倾向。

1978年，Bradley实验室用凝血因子VⅢ静脉接种4只黑猩猩，发现转氨酶升高并出现肝细胞病毒感染征象，且排除由HBV或HAV所致，证实了这种经肠道外传播的感染性因子能够导致NANBH，且为以后用黑猩猩作为NANBH的合适动物模型奠定了基础。

1979年，Shimzu等首次在黑猩猩实验动物中，从肝细胞超微结构变化的角度描述了NANBH的病原因子为一种可被氯仿及福尔马林灭活的微管形成因子[以后被证实为丙型肝炎病毒( hepatitis C virus，HCV) ]。

1980年，Grimaud在NANBH肝炎患者的肝组织中发现了50～100个圆形棒状病毒样颗粒，直径22～27 mm，与Shimzu等在动物中发现的相似。

20世纪70年代末至80年代初，发展的常规酶免疫测定(EIA)和放射免疫测定(RIA)检测NANBH的特异性抗原，仅在 Bradley实验室就进行了近40 000次测定，但均无结果,表明血液中该病毒滴度确实太低。

1982年，发现NANBH与散发性肝炎（占20%~30%)有关。

1983年，发现NANBH病毒是一种有脂质包膜的病毒。

1984年，发现其与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC)有关。

1985年，Bradley实验室对NANBH的物理化学特性进行研究，推测其为有包膜的RNA病毒，根据滤过等方法估计病毒直径在40～60 nm，毒粒的沉降系数Szow大于150，它在蔗糖中的浮力密度为1.09~1.l1 g/cm3，当时认为，这是一种类似披膜病毒的病原体。

之后，确定病原体的基因结构成了研究NANBH的实质性问题，而这一问题的解决依赖于同步发展中的分子生物学技术。

在此期间，由于分子生物学的发展，进行HCV基因组克隆所必需的技术方法，特别是构建和筛选 cDNA文库的技术渐趋成熟，而且已积累了HBV、HAV等基因组克隆的经验，核酸和蛋白测序技术、核酸和蛋白质印迹技术、基因重组技术及原核与真核细胞高效表达系统已日臻完善。

PCR技术的发展更为低滴度HCV cDNA扩增创造了良好的手段。

因此，HCV的基因克隆是在以上基础上第一个主要采用分子克隆技术方法得到甄别和鉴定的人类病毒,其采取的手段如下。

①在黑猩猩体内进行病毒传代，使之适应宿主并对黑猩猩进行免疫抑制，使病情加重而致病毒滴度提高。

1983年，Young和 Davis用以上方法从一只黑猩猩中获得了1×10^7 ID/ml的高滴度血浆。

②根据HCV的物理化学特性可推测其分类地位及基因组类型（DNA或RNA )，依据病毒对氯仿敏感的特性及用过滤方法估测其分子量，推测HCV是披膜病毒样或黄病毒样的病毒，由于黄病毒无3’聚腺苷酸[Poly (A)]尾。

因此，便在偏碱性的条件下，从高滴度病毒浓缩物中沉淀病毒，提取总RNA，采用反转录寡核苷酸随机引物合成cDNA，再插人噬菌体gt11载体中表达。

③大多数慢性病毒感染的患者体液中含有病毒的特异性抗体，故利用这些患者的血清或血浆对构建的噬菌体gtll cDNA文库进行免疫学筛选。

到1989年，Chiron公司的Choo等经筛选近1×10^6个 DNA克隆株，终于得到一个与输血后NANBH恢复期血清发生阳性特异性反应的5-1-1克隆，其在酵母中表达的蛋白称为C-100，用于检测NANBH恢复期血清中特异性抗体获得成功，从而揭开了HCV分子生物学研究的序幕。

④之后，采用反转录-PCR技术从病毒含量极低的感染性材料扩增并克隆HCVcDNA，完成HCV全基因组序列克隆及序列测定。

1989年9月27—30日，在日本东京召开的国际非甲非乙肝炎和经血传播的传染病学术会议上正式将丙型肝炎病毒命名。

1991年，国际病毒命名委员会(ICTV)将HCV归为黄病毒科丙型肝炎病毒属。

参考文献：龚国忠，成军，高志良主编. 丙型肝炎病毒感染的基础与临床[M]. 2018