人-喉癌癌组织细胞悬液制备流程

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注 |  以下操作指南中涉及的消化酶以及实验方法仅供参考，实际应用过程中请根据具体情况进行细节上的调整。

背景介绍

喉癌分原发性和继发性两种。原发性喉癌指原发部位在喉部的肿瘤，以鳞状细胞癌最为常见。继发性喉癌指来自其他部位的恶性肿瘤转移至喉部，较为少见。喉癌症状主要为声嘶、呼吸困难、咳嗽、吞咽困难、颈部淋巴结转移等。肿瘤细胞与其同源正常组织相比，细胞间的粘着性降低，故肿瘤细胞在体内容易分散和转移。我们使用美天妮公司的人肿瘤组织分离试剂盒对肠道肿瘤进行解离。

喉癌组织示意图

实验试剂及耗材

实验步骤

1. 准备肿瘤解离试剂盒的酶混合液，将100 µL的H酶、500 µL的R酶和25 µL的A酶加入到4.4mL的的 RPMI 1640培养基中。

2. 组织切成直径2-4 mm的小块。

3. 将组织转移到含有酶液的温和MACS C管中（冰上）。

4. 拧紧C管，并将其倒挂在gentle MACS Dissociator的套管上。

5. 运行 gentleMACS 中的 h_Tumor_01程序。

6. 程序终止后，将C管从gentleMACS解离器上拆下。

7. 使用MACSmix试管旋转器在37℃下连续旋转培养样品30 min。

8. 将C管倒挂在gentle MACS Dissociator的套筒上，并运行gentle MACS解离器的程序h_Tumor_02，随后将C管置于MACSmix试管旋转器上在37 ℃下连续旋转培养样品30 min。

9. 程序终止后，将C管从gentleMACS解离器上拆下。

10. 重悬细胞沉淀，使用置于50 mL离心管上的70 μm滤膜过滤。

11. 用20 mL RPMI 1640冲洗滤膜，300 xg离心7 min。完全吸出上清液。

12. 使用适当体积的缓冲液重悬细胞，使用台盼蓝血细胞计数仪分析细胞数量和活性。

结果及注意事项

细胞量：94万左右，活率91%以上，结团率15%

注：喉癌组织在取样的时候，要尽量避免掺入食道软骨或黏膜等组织，这些组织存在会使细胞悬液的杂质量增多，以及影响酶解效果

往期回顾

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