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Takara RNP基因编辑解决方案,解您所疑,排您所忧!

由于简便易用的特点,CRISPR/Cas9基因编辑技术应用广泛。然而,如何降低脱靶效应一直都是CRISPR/Cas9技术应用过程中的一个难题。近期,众多研究表明直接使用核糖核蛋白复合物(RNP:“Cas9蛋白质”和“向导RNA”的复合物) 进行基因编辑,可有效降低脱靶效应,成为CRISPR基因组编辑近期研究趋势。 


RNP导入细胞后,会迅速激活DNA剪切活性,快速切断靶标序列。另外,RNP在细胞内能够快速分解,有效避免靶标序列以外的相似序列被切断,降低脱靶效应。RNP可以通过电穿孔、显微注射以及转染的方法导入至靶标细胞。通过Google Scholar检索使用RNP进行基因编辑的文献,我们发现无论使用哪种导入法,相关文献数量都在逐年增加。

对于哺乳动物细胞基因编辑,我们通常建议导入由Cas9蛋白质和单向导RNA(sgRNA)组成的核糖核蛋白(RNP)复合物。与其他方法相比,RNP在细胞中停留的时间短,剂量小,可降低细胞毒性,减少非靶标位点的基因编辑。 


【解决方案】
Takara可提供RNP基因编辑优选工具,有效降低脱靶效应,确保实验一致性。 

【用户感言】

Takara公司的Cas9蛋白质产品高效且性能稳定


东京医科齿科大学未来基因组研究开发支援室的平冈优一先生提供了使用Guide-it Recombinant Cas9(Electroporation-Ready)(Code No. 632641)进行实验的实验例。 

在使用Takara公司产品之前,已经使用过了其他多家公司的Case9蛋白质产品。但是,由于其高浓度的甘油含量,在纤维注射时容易堵塞毛细管,带来了很大的操作压力;并且不同批次产品的基因编辑效率不稳定。为解决这个问题,对多家公司销售的Cas9蛋白质进行了调查,发现Takara公司的Cas9蛋白质甘油浓度很低,于是快速购入,分析了批间差异,同时也与其他公司产品进行了性能比较。 

使用Takara公司的Cas9蛋白质,改善了用毛细管做显微注射时的堵塞情况,大幅减轻了操作时的压力。此外,到目前为止所使用的多个批次的Cas9蛋白质性能均较为稳定,能够顺利的进行基因编辑实验。与其他公司产品相比,Takara公司的Cas9蛋白质用于同源重组修复实验,所产生的基因敲入效率更高。下表显示了使用Takara公司的Cas9蛋白质进行小鼠基因组编辑的结果。 


【细节加持】
PrimeSTAR系列高保真酶为CRISPR/Cas9研究保驾护航 


Takara Bio的PrimeSTAR系列产品是以「便于操作」、「反应性能好」为理念研发的高保真聚合酶。其中PrimeSTAR Max DNA Polymerase兼具快速延伸性和高保真性,在该系列中保真性最高,是CRISPR/Cas9研究中sgRNA和HDR模板制备的理想之选。 

【专享福利】
参加中国生物化学与分子生物学会2019年全国学术会议的小伙伴们,现场订购有优惠啦!订购PrimeSTAR Max DNA聚合酶更有好礼相送!如果您在现场,心动不如行动哦,我们在B13展位期待您的到来! 

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