呼吸道感染：病毒样本采集的重要性及规范要求

儿童呼吸道病毒感染性疾病常见，在病毒的病原诊断中，标本的采集、处理、转运和保存环节，是取得可信结果的第一步，也是基本保证。世硕新语将由中华医学会儿科学分会呼吸学组呼吸道感染协作组和《中国实用儿科杂志》编辑委员会撰写的《儿童呼吸道感染微生物检验标本采集转运与检测建议》（病毒篇），及张海邻教授对《儿童呼吸道感染微生物检验标本采集转运与检测建议（病毒篇）》解读的关键内容摘录如下。

儿童急性呼吸道感染病毒病原诊断通常采用呼吸道标本，上呼吸道标本主要包括口咽拭子、鼻咽拭子、鼻咽吸取物；下呼吸道标本主要包括痰液、气管吸取物、支气管肺泡灌洗液等。上呼吸道标本检出病毒能否真正反映下呼吸道感染病原尚有争论，但是由于儿童下呼吸道标本的获得存在一定困难，因此常用鼻咽吸取物和鼻咽拭子代替下呼吸道标本。标本采集的重要性
目前有70%～80%的临床诊断和病情评估需要实验室检测结果来辅助。获得准确可靠的检验结果依赖于分析前、分析中和分析后的质量控制，通常分析前阶段所用时间约占整个分析过程的 57%，发生在分析前的误差占整个分析过程误差的70%以上。分析前阶段按时间顺序，从临床医生提出检验申请，到分析检验程序启动时终止的步骤，包括检验申请、患者准备、原始样品的采集、标本运送到实验室并在实验室内进行传输。正确规范地采集合格的标本是分析前质量控制的重要环节。适当的标本管理对患者诊疗有决定性的影响，它是实验室准确诊断的前提，可以影响治疗决策，影响医院感染控制，影响患者住院时间、住院费用和实验室费用等。低质量标本会影响检验结果的准确性，不准确的检验结果会影响医院向患者提供最佳诊疗效果的能力。任何一个退回的检验标本，不仅会导致治疗时间的延误，还会造成再次采集标本的困难，进而影响到患者的信任，材料成本及人力成本也跟着增加，所以要强调分析前质量控制管理，提高标本的质量。标本采集的相关问题呼吸道标本是临床微生物实验室接收到的最常见的标本，但此类标本的采集和送检存在诸多不规范之处，影响了呼吸道感染病原的诊断。微生物学标本的选择和收集是由医护人员而不是实验室来完成的，因此，临床医护人员应知晓微生物标本采集和运送要求，协助实验室提供准确、有临床意义的结果。呼吸道标本主要包括口咽拭子、鼻咽拭子、鼻咽吸取物、痰液、气管吸取物、支气管肺泡灌洗液等。目前，临床微生物室接收最多的标本是痰细菌培养，然而痰标本并不是诊断细菌性肺炎的最佳标本，痰标本在某种程度上都有口咽部正常菌群的污染。由于儿童很难咳出合格的痰液，痰同样不是儿童呼吸道病毒感染检测的最佳标本。多数呼吸道病毒的主要复制部位为后鼻咽部纤毛柱状上皮细胞，其次为前鼻孔和口咽部纤毛上皮细胞，因此可用咽拭子代替痰液，且鼻咽拭子的病原检出率较口咽拭子高。鼻咽吸取物较咽拭子有更高的阳性检出率，可用于病毒核酸和病毒抗原检测，是＜2岁儿童的首选。咽拭子的采集包括鼻咽拭子和口咽拭子。多数呼吸道病毒的主要感染复制部位为后鼻咽部纤毛柱状上皮细胞，其次为前鼻孔和口咽部纤毛上皮细胞，因此，鼻咽拭子的病原检出率较口咽拭子高 。在操作前应向患儿及家长做好解释工作。采集鼻咽拭子时，应先清除鼻腔前端的分泌物，将拭子由鼻腔插入，沿鼻腔壁伸入鼻咽部直至感到一定阻力时，转动数次，然后将拭子取出。采集时，拭子应朝向耳方向而不是头顶方向。采集口咽拭子时，患儿先用生理盐水漱口，对于漱口不合格者，可嘱患儿少量饮水吐出或咽下；嘱患儿张口 发“啊”音，以暴露口咽部，必要时用压舌板压住患儿舌部，拭子越过舌根到咽后壁或悬雍垂的后侧，适度用力抹拭咽后壁和两侧扁桃体部位，并适当 旋转以增加接触面积，注意避免触及舌部。咽拭子应置入VTM或其他缓冲液中 。植绒拭子可吸附更多的生物样本并可达到较高的释放率。 采集鼻咽拭子、口咽拭子中，只能采用无菌的聚酯纤维或人造纤维制成的塑料柄拭子，不能使用藻酸钙拭子或木棒拭子，因为其可能含有灭活某些病毒和抑制 PCR 检测的物质。拭子条应使用可吸附更多生物样本并可达到较高释放率的植绒拭子，棉拭子可能含有对细胞培养有害的物质，且常不能采集到足够量的脱落细胞，不适用于鼻咽或口咽部分泌物的采集。标本送检 
因病毒活性会随着时间延长而降低，标本采集后应尽快送检。呼吸道标本应在室温下 30 min 内送检，4℃环境下可在 2～4 h 内送 检，来不及处理的标本 4℃保存不应超过 48 h 。如果预计可能延迟 24 h 才能送 检，标本应在-70℃条件下保存，但用于病毒分离的样本不推荐低温冷冻（≤-70℃）。同时标本应避免反复冻融。微生物标本保存的要求取决于选择的检验项目。对于病毒培养的检验项目，需维持微生物的活力、防止非致病菌污染和过度繁殖；核酸检验尤其是 RNA易受 RNA 酶降解，须使用经高压灭菌或经 RNase 酶清除处理过的无 RNase 酶的一次性耗材。以上内容摘录自：1.张海邻, 陈小芳. 儿童呼吸道感染微生物检验标本采集转运与检测建议(病毒篇)[J]. 中国实用儿科杂志, 2018, 33(09):6-11.2.张海邻, 李昌崇. 《儿童呼吸道感染微生物检验标本采集转运与检测建议(病毒篇)》解读[J]. 中国实用儿科杂志, 2019, 34(02):14-18.

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