SOP文件 | 厌氧培养箱标准操作规范

1 目的

规范厌氧培养箱标准操作规程，保证检验质量。

2 授权操作人员

经培训并考核通过的工作人员可操作仪器。

3 原理

利用真空泵、混合气体和二氧化碳气体共同构成培养细菌的有氧状态（空气）、微需氧状态（5%氧气）、二氧化碳状态（5 ~ 10%）和厌氧状态（80%氮气、10%氢气和10%二氧化碳），以供专性需氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌和二氧化碳需要菌的分离培养。

4 工作环境

相对湿度：10% ~ 85%；环境温度：18 ~ 30℃；电源电压：220V，50/60Hz。

5 操作程序

5.1 厌氧培养

5.1.1 首先将所有气阀全部关闭。

5.1.2 开启真空泵阀，再开启A罐体阀，将A罐体门畅开。

5.1.3 迅速地将已接种培养放入罐内，同时将105型脱氧催化剂约50克与高效干燥剂分子筛3A约15克混合后放入2只不加盖玻璃皿内，而后放入A罐内。

5.1.4 将预先备好的厌氧环境指示剂放入罐门真空玻璃前，以利观察色调变化。

5.1.5 迅速关闭罐门，扭紧。

5.1.6 开动真空泵电门，当真空度达到700Hg时，将泵阀门关闭后再关停真空泵电源。

5.1.7 开启输气总阀（即输N₂ H2 CO2阀）。

5.1.8 开启细菌滤过盘铜阀（N₂阀）用N₂冲洗罐床及管路，轻轻开启N₂瓶阀及减压器阀。

5.1.9 当真空表针由700mmＨg回复0位时，关闭N₂铜阀，再开启真空泵阀，按上重复一次，以达冲洗残余杂质-氧。

5.1.10 再按6、7、8操作按需要比例通道入N₂、H₂、CO₂气体。

5.1.11 真空表指针回复到0位时，再将钢瓶阀门关闭，再次检查所有气阀需一律关闭。

5.1.12 在已放置接种之培养基的罐门，挂一标牌，注明放物日期，并在化验单也注明罐体号。

5.2 5 ~ 10%二氧化碳培养

5.2.1 首先将所有气阀全部关闭。

5.2.2 开启真空泵阀，再开启A罐体阀，将A罐体门畅开。

5.2.3 迅速地将已接种培养放入罐内。

5.2.4 迅速关闭罐门，扭紧。

5.2.5 开动真空泵电门，当真空度达到100mmHg时，将泵阀门关闭后再关停真空泵电源。

5.2.6 开启输气总阀（即输N₂ H2 CO2阀）。

5.2.7 开启气体细菌滤过盘铜阀（CO2阀），轻轻开启CO2瓶阀及减压器阀。

5.2.8 当真空表针由100mmＨg回复0位时，关闭CO2铜阀。再将钢瓶阀门关闭，再次检查所有气阀需一律关闭。

5.2.9 在已放置接种之培养基的罐门，挂一标牌，注明放物日期，并在化验单也注明罐体号。

6 维护及保养

6.1 每日查看仪器温度。

6.2 每日清洁仪器外表面。

6.3 在初次使用时，应校对不同罐体内温度与表头指示温度是否一致，若不一致则调校。

6.4 随时保持罐体内得湿度（放一烧杯，烧杯内随时保持有水状态）。

7 校正

7.1 例行校正：温度的校正，至少每年1次。

7.2 故障校正：监测指标失控时、移位、维修后需校正。

7.3 校正后验收：校正后，微生物实验室负责人对各项指标进行核实，达标后方可。

8 应急处理

8.1 外接电源、电压必须匹配，并要求有良好的接地。

8.2 出现影响检验质量的故障，应立即转移内容物，放入备用培养箱。

8.3 出现不能解决的故障，应及时联系工程师处理并告知微生物实验室负责人。

9 注意事项

9.1 泵除供本箱应用外，也可将A、B、C、D、E、F罐体阀门关闭后，开启细菌滤过盘之铜阀及输入气体总阀，将欲真空瓶用真空橡皮管连接，开启泵阀、电源，进行真空抽滤用之。

9.2 如罐体培养物少，可用盐水瓶（加橡皮塞密封）充填空间，以达节约用气体。

9.3 减压器的装卸、使用

9.3.1 减压器的装卸应叫有资格的医院氧气供应室的工人进行装卸。

9.3.2 氧气瓶使用的减压器内外防止油污，以免氧气与油污发生化学反应引起燃烧。

9.3.3 氧气瓶放气和打开减压器时，动作要缓慢。放气太快，气体过快通过气门时会产生静电火花，可引起氧气瓶爆炸，其他可燃易爆气体如乙炔、氢等均应如此。

9.3.4 工作时应随时观察压力表的读数。

9.4 高压气瓶使用

9.4.1 氧气瓶及其专用工具严禁与油类接触，操作人员也绝对不能穿用沾有各种油脂或油污的工作服、手套以免引起燃烧。

9.4.2 高压气瓶必须分类保管，直立要固定，远离热源，避免曝晒及强烈震动，室内存放气瓶量不得超过二瓶。

9.4.3 氧气瓶、可燃性气体气瓶与明火的距离不小于10米（确实难以达到时，在采取可靠的防护措施后，方可适当缩短）。

9.4.4 高压气瓶上选用的减压器要专用，安装时螺扣要上紧。

9.4.5 开启高压气瓶时，操作者须站在侧面，即站在气瓶接口处成垂直方向的位置上，以免气流射伤人体。操作时严禁敲打，发现漏气须立即修好。

9.4.6 用后气瓶，剩余残压一般应不少于几个公斤/厘米²，不得用尽。

9.4.7 各种气瓶必须进行定期技术检验，充装一般气体的气瓶，每三年检验一次，充装腐蚀性气体的气瓶每两年检验一次。气瓶在使用过程中如发现有严重腐或其他严重损伤应提前进行检验。

9.5 气瓶的搬运、存放和充装

9.5.1 在搬运或存放时，气瓶上的安全帽应旋紧，以便保护气门勿使其偶然转动。

9.5.2 搬运充满气体的气瓶时，一定要用特殊的担架或小车。将气瓶移放时绝对不能用手执着气门，气瓶堕地及互相碰撞均能引起爆炸。

9.5.3 气瓶若装在车上应加以固定。装卸时禁止采用抛、滑或其他容易引起碰击的方法。

9.5.4 充装有互相接触后可能引起燃烧，爆炸的气体的气瓶，不应一起存放，也不能和易炸物混放在一起，也不得同车搬运。

9.5.5 气瓶瓶体有缺陷不能保证安全使用，或安全附件不全、损坏或不符合规定的，均不应送交气体制造厂充装气体。

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