SOP文件 | MicroScan鉴定标准操作规程
1 目的
规范MicroScan鉴定标准操作规程，保证检验质量。
2 适用范围
革兰氏阴性杆菌、革兰氏阳性球菌的鉴定和药敏及真菌的鉴定和药敏。
3 授权操作人员
经培训并通过考核的微生物实验室工作人员。
4 操作程序
4.1 NC31
4.1.1分离培养：
标本按《临床微生物学手册》所推荐的方法进行收集、运送和初步分离培养。
41.2 染色：
挑取纯培养细菌进行革兰氏染色。革兰氏阴性杆菌、弧菌：进行氧化酶试验，记下试验结果。
4.1.3 接种：
PRMOME系统快速接种法：用取菌针去接触纯菌落3 ~ 4次，让顶端凹槽添满菌，再用CAP（帽子）抹去多余菌，放入接种水中充分混匀，到进凹槽板（分注槽）中，用“RENOK”做96孔一次性接种（每孔约105 ~ 110μl菌液）。于孔下划有一横线的孔滴加2 ~ 3滴石蜡油。
4.1.4 孵育：
测试板上盖一块空板，35℃非CO2培养箱孵育16 ~ 24小时。
4.1.5 读板标准：
C孔（控制孔）须澄清；G孔（生长孔）须混浊，表明有细菌生长。如不满足上述条件，则不要判读药敏结果。GLU、SUC、 SOR、LYS、ARG、ORN孔中有任一孔为阳性则可加试剂。若均为阴性，则需在孵育16 ~ 24 小时。
4.1.6 加试剂：
VP | ： | 40% KOH（VP1）；5% α–萘酚（VP2）各1滴。 |
NIT | ： | 0.8% 对氨基苯磺酸（NIT1）；0.5% α–萘胺（NIT2）各1滴。（5分钟后判读） |
TDA | ： | 10% FeCl3（TDA）1滴。 |
IND | ： | 柯凡氏试剂（IND）3滴。 |
4.1.7 按最新的说明书加入试剂判断结果。
4.2 PC20
4.2.1 分离培养
标本按《临床微生物学手册》所推荐的方法进行收集、运送和初步分离培养。
4.2.2 染色：
挑取纯培养细菌进行革兰氏染色。革兰氏阳性球菌：进行触媒试验，区分链球菌科（触媒阴性）和微球菌（触媒阳性）。
4.2.3 接种：
同革兰氏阴性菌NC31接种流程
4.2.4 孵育：
测试板上盖一块空板，35℃非CO2培养箱孵育16 ~ 24小时。
4.2.5 读板标准：
PGT阳性（黄色）；RAF\LAC \TRE \ARA \MAN \SOR \MNS\ RBS\ INU9孔，有任意三个以上为阳性（黄色）。以上两个条件，任意一个符合即可加试剂判读结果。若以上两个条件均不符合，则需再孵育15 ~ 24小时。药敏MIC结果需在16 ~ 24小时内判读。
4.2.5 加试剂：
VP | ： | 40% KOH（VP1）；5% α–萘酚（VP2）各一滴。 |
NIT | ： | 0.8% 对氨基苯磺酸（NIT1）；0.5% α–萘胺（NIT2）各一滴。（5分钟后判读） |
PYR | ： | 肽酶试剂（PET）二滴。 |
如果VP阴性须等到20分钟后再确定VP是否真为阴性。
4.2.7按最新的说明书加入试剂判断结果。
4.3 RYID
4.3.1 分离培养；
沙保弱葡萄糖琼脂平板或血平板分离培养。
4.3.2 染色：
挑取纯培养细菌进行革兰氏染色，真菌。
4.3.3 接种：
调菌液浓度到3 ~ 5个麦氏单位，板上每个鉴定孔和2个质控孔（BNAC，NPC），每孔接种50μl。
4.3.4 孵育：
测试板上盖一块空板，35 ℃非CO2培养箱孵育4小时。
4.3.5 判读标准：
生长为阳性。
4.3.6 加试剂：PYR，NaOH
4.3.7 按最新的说明书加入试剂判断结果
4.4 链球菌药敏板
同革兰氏阳性（G+）平板接种流程（PC20），不加加石蜡油18 ~ 24小时观察结果判读标准：生长为阳性。
5 质量控制
5.1 质控频度：每新进一批试条做一次质控。
5.2 质控菌株：API 20E大肠埃希菌ATCC25922；API 20NE铜绿假单胞菌ATCC27853；API Staph金黄色葡萄球菌ATCC25923。
5.3 质控操作步骤参见“4 操作程序”。
6 注意事项
6.1 试验条应储存于2 ~ 8℃，有效期在包装上标明。
6.2 使用后，所有的安培、试验条和培养盒在处置之前都必须高压灭菌，烧成灰或浸泡于杀菌剂中。
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