SOP文件 | 粪便标本细菌学检验标准操作规程
1 目的
规范粪便标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果可靠。
2 适用范围
粪便培养。
3 标本
3.1 标本类型：粪便、直肠拭子。
3.2 标本采集
3.2.1 自然排便采集：自然排便后挑取其脓血、黏液部分2 ~ 3 g，液体粪便取絮状物2 ~ 3 ml，盛于灭菌容器内，或置于保存液（运送培养基）、增菌培养基中送检。
3.2.2 直肠拭子：如不易获得粪便时，或排便困难病人及婴儿，可用直肠拭子采取，即以无菌棉拭用保存液或生理盐水湿润后，插入肛门内4 ~ 5 cm（幼儿2 ~ 3 cm）轻轻转动取出，插入卡-布（Cary-Blair）运送培养基内或无菌容器内送检。
3.2.3 粪便标本应该立即送检，室温保存不能超过2小时，如不能及时送检可以放入磷酸盐甘油（pH 7.0）或转运培养基，但不能超过24小时。培养艰难梭菌的标本保存于-20℃以下。培养沙门菌和志贺菌的标本应放置磷酸盐甘油溶液中保存。保存弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2（100 mg／L）试剂。
3.3 标本拒收标准
3.3.1 粪便标本放置时间超过2小时。
3.3.3 直肠拭子未置于运送培养基中。
4 试剂、仪器
4.1 革兰染液、氧化酶试剂、麦康凯平板、SS平板、TCBS平板及相关生化试剂等。
4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定药敏、革兰阳性菌鉴定药敏卡、药敏纸片等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。
4.4 诊断血清。
5 检验步骤
接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
5.1 涂片检查粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。因此，粪便标本一般不作涂片检查。只有怀疑霍乱弧菌及菌群失调所致腹泻时，才作直接涂片检查（观察动力和菌群比例）。
5.2 培养
5.2.1 沙门一志贺菌培养：在HE或SS平板上35培养18 ~ 24小时，在HE平板上形成绿色透明的小菌落，在SS平板上呈无色透明细小的菌落。志贺菌TSI为K/A，发酵葡萄糖，不发酵乳糖，无动力、硫化氢阴性.符合上述特性者,可通过血清凝集实验作出诊断。沙门在SS平板上呈无色透明或中心黑色的菌落，TSI为K/A，发酵葡萄糖，不发酵乳糖，动力阳性、硫化氢阴性或阴性。符合上述特性者，可通过血清凝集实验作出诊断。
5.2.2 霍乱弧菌培养：参见《霍乱弧菌检验标准操作规程》。
5.2.3 小肠结肠炎耶尔森菌培养：参见《耶尔森菌属检验标准操作规程》。
5.2.4 空肠弯曲菌培养：参见《弯曲菌属检验标准操作规程》。
5.2.5 金黄色葡萄球菌培养：参见《葡萄球菌属检验标准操作规程》。
5.2.6艰难梭菌培养：取水样或黏液样粪便立即接种于环丝氨酸头孢西丁果糖琼脂（简称CCFA）平板上，并将粪便作102 ~ 106稀释后定量接种。35℃厌氧环境下培养48小时后，选择粗糙型黄色菌落，移种于葡萄糖庖肉培养基作毒素测定；同时制涂片，悬滴检查动力、革兰染色及生化鉴定。
5.2.7 真菌培养：参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》。
5.2.8 气单胞菌和邻单胞菌的培养：参见《气单胞菌属检验标准操作规程》和《邻单胞菌属检验标准操作规程》。
6 操作流程
7 结果报告
7.1 阳性
报告细菌种名（血清型）和药敏结果。
7.2 阴性
7.2.1 常规细菌培养阴性应报告“未检出沙门氏菌、志贺氏菌、气单胞菌、邻单胞菌、弧菌、迟缓爱德华氏菌。未检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及酵母菌过度生长”。
7.2.2 特殊细菌培养阴性时应报告相应细菌的阴性筛选结果，如“弯曲菌培养阴性”。
当检查水样便，发现动力及制动试验均为阳性或分离菌对O1群或O139抗血清凝集实验阳性时均应立即与主管医生联系并上报卫生防疫部门。当培养出沙门氏菌、志贺氏菌少见血清型时应向卫生防疫部门申请鉴定。
8 注意事项
查出肠道致病菌，报告其菌名和药敏结果。
8.1 空肠弯曲菌是微需氧菌，初次分离时需5％ ~ 10％ CO2和85％氮。
8.2 痢疾病入要采集大量脓血标本另行培养。
8.3 粪便标本有很多杂菌，便不能由此认为粪便标本的采集就无需注意杂菌污染，为防止污染必须注意标本的采集方法。
9 临床意义
正常情况下肠道中有多种细菌寄生，包括大量的厌氧蔺、肠球菌、大肠埃希菌、肠杆菌、变形杆菌、粪产碱杆菌等。引起感染性腹泻的病原微生物有：①细菌性：产毒素型腹泻，包括霍乱弧菌、肠毒索型大肠埃希菌等；侵袭型腹泻，包括志贺菌、肠致病型大肠埃希菌和肠侵袭型大肠埃希菌等；食物中毒，包括沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蜡样芽胞杆菌和肉毒梭菌等；伪膜性肠炎，包括艰难梭菌或金黄色葡萄球菌；慢性腹泻，可能由结核杆菌引起。②真菌性：念珠菌、毛霉菌等。③病毒性：轮状病毒等。
10 危急值报告
培养出霍乱弧菌、伤寒沙门菌、致病性大肠埃希菌O157等及时按传染病报告，同时送CDC复核。