SOP文件 | 碱性磷酸酶染色(NAP)萘酚磷酸盐法操作规程及临床意义

原理：

细胞内碱性磷酸酶可水解底物萘酚ASBI磷酸盐，释放出不溶性萘酚，后者能偶联重氮盐，如坚固紫红LB或坚固紫B从而形成有色染料而沉着胞浆中，通过显微镜观察中性粒细胞了解其碱性磷酸酶活性程度。

目的：根据NAP积分的高低，协助诊断某些疾病。

试剂：

1、固定液：先将0.03mol/L枸橼酸钠溶液32ml与0.03 mol枸橼酸液168ml混合，然后加入纯丙酮300ml,注意边加边搅拌。

2、缓冲液：21g2-氨基-2-甲基-1-,3-丙二醇稀释至1000ml，此为贮存液，此液PH为9.4-9.6,缓冲液在4℃可保存6个月，使用前必须平衡至室温。

3、染色液：5mg萘酚AS-BS磷酸盐，溶解于二甲基甲酰胺0.2-0.3ml中，加入上述缓冲液60ml，随后再加入坚固紫红LB40mg，搅拌使溶，过滤后立即使用，此液必须新鲜配制。

4、苏木素复染液：1g苏木素加蒸馏水至500ml，碘酸钠200mg及硫酸钾铝50g ,充分混匀，置棕色玻璃瓶中室温保存，用前过滤。

操作：

1、用末稍血或肝素抗凝血制备血片均可，24h内在室温下用固定液固定30s。用蒸馏水轻轻地冲洗30-60s，空气中干燥或用滤纸轻轻吸干，最好立即染色。已固定的涂片可在冰箱中保存2-3周，但酶活性要损失约10%。

2、固定后血涂片用染色液染色10min,再用蒸馏水冲洗30-60min

3、置苏木素复染液中复染5-8min，蒸馏水冲洗1-2min,空气中干燥或滤纸小心吸干，然后用油镜检查。 

结果判断：

NAP阳性颗粒为红色。根据100个中性粒细胞胞浆内NAP颗粒的多少进行从0-4+计分，再将100个细胞分值相加，即得总积分值。注意只限于成熟的带形及多形核中性粒细胞，不计算  淋巴细胞，嗜酸性和嗜碱性粒细胞。

参考值：

健康成人一般的中性粒细胞碱性磷酸酶积分为13-130。

临床意义：

1、NAP活性反应主要见于中性粒细胞系统成熟阶段，其它细胞皆为阴性。NAP活性增高见于细菌性感染，类白血病反应。病毒性感染时则不增高。

2、未经治疗的慢性粒细胞白血病，中性粒细胞NAP活性明显下降，能常积分值在0-13。如慢粒在合并细菌感染或急变时，NAP积分值可从原来的低水平转为增高。

3、真性红细胞增多症患者的积分值通常在参考值上限或增高，而阵发性夜间血红蛋白尿患者细胞NAP积分值一般均很低。

4、白血病前期与增生性再障的鉴别，前者NAP积分值常降低，而后者则常增高。

5、垂体，肾上腺皮质功能亢进及应用皮质激素时NAP活性增强。

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