SOP文件 | 抗精子抗体(金标免疫斑点法)操作规程及临床意义

目的： 

规范抗精子抗体（As-Ab）的检测的操作

范围：

检验科免疫实验室

责任人：

免疫实验室专业组长和实验室工作人员

检测原理：

斑点反应板上的固相精子膜抗原特异地与人血清等标本中的As-Ab结合形成复合物,胶体金标记的抗人IgG(或IgM、IgA)抗体（试剂B）再与复合物结合，形成肉眼可见的红色圆斑。

试剂规格：

每盒40人份

试剂盒组成：

1、斑点反应板：40块，有效成分：固相精子膜抗原。

2、试剂A：1瓶（~10ml），含TBS缓冲液等。

3、试剂B：1瓶（~6ml），含胶体金标记抗人IgG（或IgM、IgA）。

4、标本吸管：40支，每滴约50ul。

5、阳性对照卡：一张。

标本采集：

本试剂可以使用血清标本，若可能尽量使用新鲜标本。

1、离心全血得到血清标本，备用。

2、也可以使全血自然凝结，分离出血清，备用。

3、若标本不能立即使用，血清标本应储存在2-8℃的冰箱中；对于保存期超过三天，推荐冷冻（-20℃以下）保存；使用前，标本应平衡到室温；不要反复冻融标本。

操作方法：

1、加试剂A2滴于反应板孔中，待液体充分吸入。

2、用样品吸管加样品0.15ml（4滴）于反应板孔中，待液体充分吸入。

3、去除蓝色过滤盖。

4、加试剂B3滴于反应板孔中，待液体充分吸入。

5、加液体A1-2滴于反应板孔中，待液体吸入后观察结果。

参考范围：

阴 性

结果判定：

反应孔中央出现红色圆斑与红线为阳性，只出现红色横线为阴性，圆斑与横线均不出现为试剂失效。

注意事项：

1、试剂盒从冰箱取出时，应恢复温度（＞30℃）后使用。

2、试剂B若出现明显颗粒状沉淀或变兰色为失效。

临床意义：

大量研究表明，在多种易致不育（孕）因素中，以抗精子抗体最为密切，可占原因不明不育患者的20%以上，男性体内的血-睾屏障因疾病或创伤受损时，原来与免疫系统隔离的精子及其可溶性抗原外逸，激发机体产生抗精子抗体，影响精子的功能，造成男性不育。女性生殖道内的酶系统能降解进入的精子抗原，使其不能刺激机体产生相应的抗体，但当该酶系统缺陷时，精子抗原得以保持其完整抗原性而刺激产生抗精子抗体。这种抗体可流至宫颈黏液中，导致精子凝集或制动，造成女性不孕。因此检测抗精子抗体在临床上有助于不育症的诊断。 As-Ab存在于血清、精浆和宫颈粘液中，血清中As-Ab通常以IgG、IgM为主，精浆中通常以IgA、IgG为主。

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