疑似毒品中甲基苯丙胺的气相色谱、高效液相色谱和气相色谱－质谱检验方法(20131102)
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中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会2013年7月19日发布，自2013年11月1日起实施。
·前 言
本标准按照GB/ T1.1- 2009 给出的规则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析标准化分技术委员会（SAC/TC179/SC1）提出并归口。
本标准起草单位公安部物证鉴定中心、上海市公安局物证鉴定中心。
本标准主要起草人：高利生、张玉荣、张春水、郑萍、王跨陡、张润生、钱振华、徐鹏、黄星、王一、汪蓉、王蔚昕、常颖、刘克林。
1范 围
本标准规定了甲基苯丙胺的气相色谱M质谱（GC-MS）定性分析和气相色谱（GC）、高效液相色谱( HPLC）定量分析。
本标准适用于毒品案件固体样品中甲基苯丙胺的定性定量检验鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本〈包括所有的修改单）适用于本文件。
GA/T122毒物分析名词术语
3术语和定义
GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。
4原 理
本方法采用内标法或外标法进行质量控制，对疑似毒品固体样品中的甲基苯丙胺进行有机溶剂提取，用气相色谱－质谱联用（GC-MS）进行定性分析，用气相色谱－氢火焰离子化检测器（GC-FID）或高效液相色谱（HPLC）对甲基苯丙胺进行定量分析。
5试剂及标准物质、仪器及量器具
5.1试剂及标准物质
5.1.1GC、GC-MS 分析用试剂及标准物质
所用试剂均为分析纯，分析用试剂及标准物质包括：
a) 甲醇；
b) 可溯源标准物质：甲基苯丙胺；
c) 外标定量用1.0mg/mL甲基苯丙胺标准储备液＝称取甲基苯丙胺标准物质（根据标准物质纯度和盐型换算后等于50.0mg 的甲基苯丙胺），放入50mL容量瓶中，加人20 mL甲醇振荡溶解后，用甲醇稀释至刻度，配制成1.0mg/mL甲基苯丙胺标准储备液，置冰箱冷冻保存，保存时间为6个月；
d) 外标定量用0.1mg/mL甲基苯丙胺标准工作液：移取1.0mg/m甲基苯丙股标准储备液5 mL加入到50 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成 0. 1mg/mL甲基苯丙胺标准工作液，置冰箱中冷藏保存，保存时间为3个月 ；
e) 外标定量用0.01mg/mL甲基苯丙胺标准工作液：移取0.1 mg/mL甲基苯丙胺标准工作液 1 mL加人到10mL容量瓶中，用甲晖稀释至刻度,配制成0.01mg/mL甲基苯丙胺标准工作液,置冰箱中冷藏保存,保存时间为1个月；
f) 内标物:正十烧；
g) 内标物溶液:称取正十烧（根据标准物质纯度换算后等100.0mg的正十烧），放100mL容量瓶中，加入约20mL甲醇，振摇至样品溶解，超声5 min，用甲薛定 容至刻度，配制成1.0mg/mL正十信内标储备液（置于冰箱中冷冻保存，保存时间为12个月〉，使用时用甲回事稀释到0.1 mg/mL，内标物溶液应置于冰箱中冷藏保存，使用前取出放至室温后方可使用，保存时间为 2个月；
h) 内标法绘制标准工作曲线用标准工作液：称取甲基苯丙胺标准物质（根据标准物质纯度和盐 型换算后等于25.0 mg 的甲基苯丙胺），放入50 mL 容量瓶中，加人0.1mg/mL正十烧溶液20mL，振荡溶解后用0.1mg/mL 正十烧溶液稀释至刻度，配制成0.5mg/mL甲基苯丙胺标准溶液，并依次用0.1 mg/mL 正十皖溶液稀释到0.2mg/mL、0.1mg/mL、0.05mg/mL、0.01mg/mL浓度。
5.1.2HPLC分析用试剂及标准物质
所用试剂均为色谱纯，实验用水为高纯水,分析用试剂及标准物质包括：
a) 甲醇。
b) 乙腊。
c) 水合磷酸二氢铀。
d) 浓磷酸。
e) 磷酸缓冲溶液（0.3mol/L, pH =3）：称取水合磷酸二氢铀固体93.6g，加入 200mL 高纯水溶解；取浓磷酸2mL，稀释至10mL ，配置成稀磷酸溶液；逐滴加入上述稀磷酸溶液调节NaH 2P04 溶液的pH至3.0（士0.2）（约加入8mL ～9mL），倒入2000mL的容量瓶中,加入高纯水稀释至刻度，摇匀。过滤、超声,即可使用。
f) 内标物色胶。
g) 内标溶液配制z称取色胶粉末51.03mg，放人500mL 的容量瓶中，加入甲醇〈色谱纯）稀释到刻度，振摇至样本榕解，超声5min，配制成 0.1 mg/mL的色胶溶液。内标溶液应存放在冰箱中冷藏保存，使用前取出放至室温后方可使用，保存时间为2个月。
h) 可溯源标准物质z 甲基苯丙胺。
i) 2.7mg/mL 甲基苯丙胺标准溶液 ：称取盐酸甲基苯丙股标准品粉末约,36mg，放人10mL的容量瓶中，加入内标溶液稀释到刻度 ，振摇至样本榕解，超声5min。按照实际称量质量。反算出溶液的浓度，贴上标签，存放在冰箱中冷藏保存，使用前取出放至室温后方可使用。保存时间为 2个月。
j) 2.2mg/mL甲基苯丙股标准溶液 ：取甲基苯丙胶浓度为2.7mg/mL 的标准溶掖4mL，放入5 mL的容量瓶中，加入内标溶液稀释到刻度,振摇至样本溶解,超声5min。按照实际数值，反算出溶液的浓度，贴上标签,存放在冰箱冷藏中保存，使用前取出放至室温后方可使用。保存时间为2个月。
k) 1.24 mg/mL甲基苯丙胺标 准溶液：取甲基苯丙股浓度为 2.7 mg/mL的标准溶液 2.3mL，放人5mL的容量瓶中，加入内标溶液稀释到刻度，振摇至样本溶解，超声5min。按照实际数值，反算出溶液的浓度，贴上标签，存放在冰箱中冷藏保存，使用前取出放至室温后方可使用。保存时间为2个月。
1) 0.46 mg/mL 甲基苯丙胺标准溶液：取甲基苯丙股浓度为2.7mg/mL 的标准溶液 0.85 mL, 放入5mL的容量瓶中，加人内标溶液稀释到刻度，振摇至样本榕解 ，超声5 min。按照实际数值，反算出溶液的浓度，贴上标签，存放在冰箱中冷藏保存，使用前取出放至室温后方可使用。保存时间为2个月。
m) 0.06mg/mL甲基苯丙股标准溶液z 取 甲基苯丙股浓度为0.46mg/mL 的标准溶液0.65mL，放入5mL的容量瓶中，加人内标溶液稀释到刻度，振摇至样本榕解，超声5min。按照实际数值，反算出溶液的浓度，贴上标签，存放在冰箱中冷藏保存，使用前取出放至室温后方可使用。保存时间为2个月。
n) 0.006mg/mL甲基苯丙胺标准溶液：取甲基苯丙股浓度为0.06mg/mL 的标准溶液1mL，放人 10mL的容量瓶中，加人内标溶液稀释到刻度 ，振摇至样本溶解，超声5min。按照实际数值，反算出溶液的浓度，贴上标签，存放在冰箱中冷藏保存，使用前取出放至室温后方可使用。保存时间为2个月。
5.2仪器及量器具
5.2.1GC、GC-MS 分析用仪器及量器具
GC、GC-MS分析用仪器及量器具包括z
a) 气相色谱仪，配有火焰离子化检测器（FID ) ;
b) 气相色谱－质谱联用仪，配有电子轰击源E（I);
c) 高速离心机，最大转速8000 r/min;
d) 电子天平，实际分度值 d= O.01 mg;
e) 电动振荡器；
f) 10mL和1mL 移液器或移液管；
g) 10mL瓶口移液器。
5.2.2HPLC分析用仪器及量器具
HPLC分析用仪器及量器具包括：
a) 液相色谱仪，配有二极管阵列检测器 z
b) 电子天平，实际分度值d= O.01mg;
c) 2000mL容量瓶；
d) 1mL移液器或移液管。
6定性分析
6.1样品制备
样品充分研磨混匀，称取约10 mg，加入10 mL 甲醇，密封并振荡10 min，离心后取上清液，用GCMS分析。如果样品溶液中目标物浓度过低,可适当增加样品称量量2倍～10倍。同时用 GC-MS 分析0.002mg/mL的甲基苯丙胺标准溶液进行质量控制。
6.2气相色谱－质谱联用仪参考条件
以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整z
a) 离子源：EI ;
b) 质量范围:40amu～500amu;
c) 采集方式：全扫描（Scan) ;
d) 色谱柱类型：DB--5MS 石英玻璃毛细柱（5% 苯基＋ 95 %聚二甲基硅氧皖）或其他等效柱；
e) 色谱柱参数:30mXO.25mm×0.25 µm;
f) 色谱柱温程：初始 温度60℃,以15℃／min 升温至280℃,保持15min;
g) 进样口温度:280℃ ；
h) 传输线温度:250℃ ；
i) 离子源温度:230℃ ；
j) 分流比:20:1
k) 载气：高纯氮气（ He) ;
1) 柱流量（恒流）:1:0mL/min;
m) 倍增器电压：参考调谐状况；
n) 溶剂切割:3 min。
7定量分析
7.1气相色谱外标法
7.1.1含量范围预分析
预分析的目的在于要对样品中的甲基苯丙胺含量进行初测，以计算准确定量分析时所用样品的称量质量，从而保证准确定量时样品溶液中目标物的最终浓度尽可能接近所使用标准工作液的浓度。
称量约 10mg 样品置于带盖试管中，加入10 mL 甲醇振荡使其溶解，离心后取上清液，用GC-FID分析，采用0.1mg/mL的甲基苯丙胺标准工作液作为定量参照。
如果样品溶液中目标化合物的浓度过高,可适当减少样品称量质量，或将样品提取液用甲蹲稀释后进行分析。
如果样品溶液中目标化合物的浓度过低，可适当增加样品称量质量，或将样品提取液挥干、定容后进行分析。
按式 (1）计算样品中目标组分的含量。
ω 一一一样品中甲基苯丙腊的含量，% ；
Cc，－标准工作液中甲基苯丙胺的浓度，单位为毫克每毫升（mg/ mL) ;
A 一一－样品溶液中甲基苯丙胺的色谱峰面积值；
V1 －---样品溶液初次定容体积，单位为毫升（mL ) ;
V3 一一将民 稀释时加入甲醇的体积，单位为毫升（mL) ;
A。一一标准工作液中甲基苯丙胺的色谱峰 面积值；
V2－一一从V 1 中移取样品溶液的体积，单位为毫升（mL) ;
m 一一 用于测定的样品的称量质量，单位为毫克（mg）。
7.1.2准确定量
7.1.2.1称量质量的计算
根据预分析中甲基苯丙胺含量测定结果，选择合适的定容体积、稀释倍数（样品提取操作参数选择参见表 A. 1），并按式（2）计算出样品称量质量（m）。
式中 ：
m 一一称量质量，单位为毫克（mg) ;
Co－ 标准工作液中甲基苯丙胺的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL) ;
V 一一初次定容体积，单位为毫升（mL) ;
D 一一稀释倍数z
w 一一样品中甲基苯丙胺的预分析含量，%。
7.1.2.2样晶提取
根据 7.1.2.1 计算结果，平行称取样品6份，根据预分析含量范围,加人相应初次定容体积的甲醇。密封并振荡10min；如果 样品溶液需要稀释，移取1mL 样品提取液至另一试管中，按照稀释倍数进行稀释定容，离心后取上清液用GC-FID 分析。样品提取操作参数选择参见附录 A 中表A.l。
7.1.2.3气相色谱仪参考条件
以下为参考条件，按照本法所获得的气相色谱图参见附录B中图B.l，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：
a) 检测器：FID;
b) 色谱柱型号：DB-5 石英玻璃毛细柱（5% 苯基十95 %聚二甲基硅氧烧）或其他等效柱；
c) 色谱柱参数:30 m×0.25mm×0.25µm;
d) 色谱柱温程：初始温度80℃，以10℃／min 升温至200℃,>以40℃／min升温至280℃，保持3min;
e) 进样口温度:280℃ ；
f) 检测器温度:300℃ E
g) 载气:高纯氮气（N2) ;
h) 分流比:20:1;
i) 柱流速（恒流）:1 mL/min;
j) 燃烧气：H2 ;
k) 燃烧气流速:按仪器默认值；
1) 助燃气:空气；
m) 助燃气流速：按仪器默认值。
7.1.2.4含量计算
按式(1）计算样品中甲基苯丙腔的含量。
7.2气相色谱内标法
7.2.1标准工作曲线绘制及监测
7.2.1.1标准工作曲线绘制
采用 0. 5 mg/mL、0.2mg/mL、0.1mg/mL、0.05 mg/mL 、0.01mg/mL 等5个浓度绘制成线性范围为0.01mg/mL～0.5mg/mL的甲基苯丙胺标准工作曲线。标准工作曲线应随内标储备液的更换而重新绘制。
7.2.1.2标准工作曲线监测
采用 5.1.lh）中浓度为0.05 mg/mL 和 0. 5 mg/mL 的标准物质溶液作为监测样品，建立标准工作曲线时，每个监测样品各分析10 次，计算甲基苯丙胺与正十烧峰面积比值的平均值及标准偏差（SD）。每次检验前先分析监测样品，若监测样品的结果在平均值士3SD之间，则标准工作曲线有效，否则，应重新绘制标准工作曲线。
7.2.2内标定量
7.2.2.1提取操作
平行称取样品2份各约30 mg，加入0.1 mg/ mL 内标溶液60 mL,充分振荡，离心后用GC-FID 分析，采用 7.2.1.1 的标准工作曲线进行定量计算。
如样品溶液中目标物浓度低于0.01 mg/mL时，可适当增加样品称量质量2倍～10倍。
7.2.2.2气相色谱仪参考条件
同 7.1.2.30
7.2.2.3含量计算
根据 7.2.1.1的标准工作曲线计算样品含量。
7.3液相色谱内标法
7.3.1标准工作曲线绘制及监测
7.3.1.1标准工作曲线绘制
采用 0.06mg/mL、0.46mg/mL、1.24mg/mL、2.2 mg/mL、2.7mg/mL 等 5 个浓度绘制成建立线性范围在0.06mg/mL～2.7mg/mL 的标准工作曲线。标准工作曲线应随内标储备液的更换而重新绘制。
7.3.1.2标准工作曲线监测
采用 5.1.2i) 中2.7mg/ mL 的标准物质溶液和 5.1.2m）中0.06mg/ mL 的标准物质溶液作为监测样本，每次检验前先分析监测溶液。若监测样本的结果在士2SD 之间，则工作曲线有效。
7.3.2定量分析
7.3.2.1提取操作
称取样本2 份，每份2.3mg～2.7mg，分别放入自动进样器小瓶中，用移液器加入1 rnL 的内标 溶液，振荡至样本充分溶解，过膜，装入自动进样小瓶，供液相色谱仪分析。
7.3.2.2液相色谱仪参考条件
以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整z
a) 检测器：二极管阵列；
b) 色谱柱参数：5 µm ODS,250 mm×4.6 mm;
c) 柱温：35 ℃；
d) 进样体积：5.0 µL;
e) 流动相：缓冲液：乙睛（87 : 13);
f) 流速：1.0mL/min;
g) 检测波长：250nm，带宽为4nm，参比波长为 400nm，参比带宽为 1nm。
7.3.2.3含量计算
根据 7.3.1.1 的标准工作曲线计算样本含量。
8结果评价
8.1定性结果评价
8.1.1GC-MS分析 0.002 mg/mL 甲基苯丙胺标准溶液,检测出甲基苯丙胺m/z58特征 离子峰 ，样品浓度10mg/mL，未检测出 甲基苯丙胺m/z58 特征离子峰，阴性结果可靠。检验结果表述为z样品中未检出甲基苯丙胺成分。
8.1.2如果样品出峰时间与甲基苯丙胺标准物质保留时间一致,且质谱特征峰及其丰度比与甲基苯丙胺标准物质一致（甲基苯丙胺的特征离子：m /z58（基峰）、m/z9l、m/zl34 、m/zl48,甲基苯丙 胶的质谱图见图B.2），阳性结果可靠。检验结果 表述为z 样品中检出甲基苯丙胺成分。
8.2定量结果评价
8.2.1气相色谱外标法
8.2.1.1异常值检验
根据Grubbs方程，按式（3）对6 份（或5份）平行测定数 据进行可疑值判别,如果Gi<Gm(95)，则数据有效,否则应剔除该数据,但只能剔除1个数据,否则本次测定元效,需要重新检验 。
式中 ：
X i 一一可疑值；
x o－一 平均值 ；
s 一－ 6 个（或 5 个）数据的单次测定标准差 。
当测定次数n= 6 时，G6<95> = 1.822 ；当测定次数n = 5 时，G5<95> = 1.672。
8.2.1.2含量结果计算
以 6 份（或5 份）样品含量测定的平均值作为含量结果 。
8.2.2气相色谱内标法
8.2 2.1含量结果有效性
对两个平行测定数据按式（4）进行相对相差（RD）计算，RD不超过10%，数据有效 ；否则 ，应重新检验。
式中 z
RD一一相对相差，%；
X1 、X2 一一两个样品平行定量测定的含量数值；
X一一两个样品平行定量测定含量的平均值。
8.2.2.2含量结果计算
以两份样品测定含量的平均值作为含量结果。
8.2.3液相色谱内标法
8.2.3.1含量结果有效性
同 8.2.2.10
8.2.3.2含量结果计算
同 8.2.2.2.
8.3含量结果表述
定量检验完成后，检验结果应表述为：从样品中检出甲基苯丙胺成分，其中甲基苯两胶含量为××．×%。
8.4测量不确定度的评定与表述
如需提供测量不确定度，测定结果的不确定度评定与表述应符J合JF 1059. 12012 的要求。
·附 录 A
（资料性附录）
外标定量法样品提取操作参数选择表外标定量法样品提取操作参数选择见表 A.l.
表 A. 1外标定量法样品提取操作参数选择表
·附 录 B
（资料性附录）
甲基苯商睦相关谱图甲基苯丙腊的色谱图及质谱图见图B.1 和图B.2.
图B.1 甲基苯丙服气相色谱图
图B.2 甲基苯丙股质谱固
戴卫祥 律师
戴卫祥，男，辽宁东亚律师事务所合伙人，三级律师，工学、法学学士学位。现任辽宁省律师协会政府法律顾问专业委员会委员、辽宁省省级人民监督员，大连市律师协会房地产与建设工程法律专业委员会副主任，大连市司法局法律顾问。
2001年从事法律工作，具有多年工作经验、律师执业经验及4年工程建设现场管理经验，先后担任恒大集团大连公司、辽宁公司监察室主任。执业以来，代理过建设工程鉴定、刑事鉴定、机动车交通事故鉴定、医疗损害及医疗产品质量鉴定、消防工程鉴定、环境损害鉴定等各类司法鉴定案件，积累了丰富的司法鉴定办案经验，并成功代理过多起通过司法鉴定确定无罪的刑事、司法鉴定行政确认等案件，在司法鉴定专业有深入、系统的研究和实践。
执业期间，秉承“忠实、勤勉、认真、专业”的执业理念，为多家企业及个人办理几百起成功案件，以认真细致地专业服务，赢得了当事人的一致认可和信赖。
戴卫祥律师联系方式
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