【微生物 08】如何快速复习细菌检测技术（上）
点击上方蓝字关注我，我们一起成长。
嗨咯，大家好，我是一只辣梨 尼古拉斯.辣梨。
今天要跟大家分享如何快速复习完细菌检测和病原球菌（上）。
内含思维导图，不过因为图片过大，剪辑后会比较模糊，需要完整图可回复关键词【微生物08】。
让我看看还有哪个小婊贝，
只白嫖，不点赞、不收藏、不认真学。
就.......
明白意思了吧！？
话不多说，开整！
先来画画重点。
形态学检查 革兰染色、抗酸染色、不染色
分离培养 培养基、颜色、气味、菌落
基本生化反应 碳水化合物、蛋白代谢、呼吸酶、复合生化
非培养技术 免疫学、毒素检验
1、微生物是存在于自然界的一大群形体 微小、结构简单、肉眼不能直接看到，必须 借助光学显微镜或电子显微镜放大数百至数万倍才能看到的微小生物。
2、微生物中的三型八大类：
3、细菌L型及其检测；
（1）细菌 L型，是指在某种情况下细胞壁肽聚糖结构可遭破坏，或当其合成受到抑制时形成的一类细胞壁缺陷的细菌。这种细菌一般情况下，仍然能进行有效生长和增殖。
（2）鉴定试验：革兰染色、细胞壁染色、分离培养及鉴定。
（3）鉴定要点包括：
①形态染色特点具有明显的多形性，革兰染色易变性；
②生长情况 L型平板上可形成油煎蛋样菌落， 也可为颗粒型菌落，少数为丝状菌落；
③返祖试验。
（一）显微镜检查
1、普通光学显微镜：最大分辨率为 0.2um
2、暗视野显微镜：多用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察
（二）不染色检查
1、主要使用压滴法 、悬滴法，用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况。
2、动力判断：细菌如有动力，活泼有明显的方向性位移；细菌如无动力，受水分子撞击细菌呈现布朗运动。
3、临床意义：初步鉴定病原菌。
如疑似霍乱患者，可取其米泔水样便,制成压滴或悬滴标本，高倍镜或暗视野下观察细菌动力。
若见穿梭样运动的细菌,则同法再制备一标本并加入 01群霍乱弧菌抗血清，若细菌的活跃运动现象消失,称之为制动试验阳性,可初步推断为“疑似 01群霍乱弧菌"。
（三）染色检查
1、革兰染色
(1) 过程：初染→媒染→脱色→复染（结晶紫1min 水洗 → 碘液1min 水洗 → 95%酒精 水洗 → 石炭酸复红 30s 风干）
(2) 结果：G+ 紫色，G- 红色；
(3) 原理（3种）：
①细胞壁学说：G+ 细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入；G-细胞壁结构较疏松，肽聚糖层少，脂质含量多，乙醇易渗入，容易脱色；
②等电点学说：G+菌的等电点低(pI2~3)，G-菌等电点较高(pI4~5)。在相同 pH条件下，G+菌所带负电荷比G-菌多，与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固且不易脱色；
③化学学说：G+菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐，易与结晶紫和碘牢固地结合成大分子复合物，不易被乙醇脱色，G-菌细胞内含极少量的核糖核酸镁盐，吸附染料量少，形成的复合物分子也较小，故易被乙醇脱色。
(4) 临床意义：
① 鉴别细菌：将所有细菌分为 G+菌和 G-菌两大类。
② 可初步识别细菌，缩小范围，有助于进一步鉴定。
③ 可作为药物选择参考：大多G+菌的致病物质是外毒素，而 G- 菌大多能产生内毒素，两种致病作用不同。
④ 有利于疾病诊断和鉴别诊断、治疗监测、预后评估等。
2、抗酸染色
（1）步骤：
① 初染，滴加石炭酸复红2-3滴，染色3-5分钟后用水冲洗。
② 脱色，3%盐酸酒精脱色30秒~1分钟；用水冲洗。
③ 复染，用碱性美兰溶液复染1分钟，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察。
（2）【原理】某些细菌细胞壁内有大量脂质，在室温下常常抵抗苯胺等染料的染色，但随着梁色时间的延长或染色时加热，它们可以吸收染料着色，一旦着色，该类细菌可以抵抗盐酸乙醇的脱色作用，故名抗酸染色。
（3）临床意义：疑似结核分枝杆菌感染的标本，经抗酸染色后，若查见红色抗酸杆菌，可报告为“找到抗酸分枝杆菌”， 即可作出初步鉴定。帮助结核病、麻风病等疾病的细菌检查。另外，若改变脱色剂，诺卡菌属可呈弱抗酸性.
3、负染色
负染色是-种使标本的背景着色而细菌不着色的染色方法。实际工作中还可用于检查细菌的荚膜，镜下可见黑色背景中蓝色菌体周围包绕一层无色透明的荚膜。
4、荧光染色
荧光染色是用能够发荧光的物质对标本进行染色，在荧光显微镜下观察发荧光的细菌。目前主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等病原菌的检测。如痰标本涂片、固定后用荧光染料金胺o法染色，镜下可观察到呈金黄色荧光的菌体。
5、特殊染色
鞭毛染色——非发酵菌
荚膜染色——肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、炭疽芽孢杆菌、产气荚膜梭菌
异染颗粒——白喉棒状杆菌；（检测到异染颗粒，可初步报告“检出形似白喉棒状杆菌”）
（一）培养基
1．定义：人工方法配制而成，适合于微生物繁殖需要的混合营养基质。合适的培养基不仅可以用于细菌的分离、纯化、穿戴及菌种保存等，还可以用于细菌的生理、生化研究。
2．分类；
（1）按用途分类：
① 基础培养基：含有基础生长所需的基本营养成分，最常用的是肉浸液，俗称肉汤，主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。基础培养基广泛用于细菌的增菌、检验，也是制备其他培养基的基础成分。
② 营养培养基：在基础培养基中可加入葡萄糖、血液、生长因子等特殊成分，供营养要求较高的细菌和需要特殊生长因子的细菌生长。最常用的是血琼脂平板、巧克力血平板等。
③ 鉴别培养基（differential medium）：利用细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物的不同，在培养基中加入特定的作用底物和指示剂，观察细菌生长过程中分解底物所释放的不同产物，通过指示剂的反应不同来鉴别细菌。例如糖发酵管、克氏双糖铁琼脂（KIA）、伊红-亚甲蓝琼脂和动力-吲哚-尿素（MIU）培养基等。
④ 选择培养基（selective medium）：在培养基中加入抑制剂，去抑制标本中的杂菌生长，有助于所选择的细菌种类的生长。例如培养肠道致病菌的SS琼脂，其中的胆盐能抑制革兰阳性菌，枸橼酸钠和煌绿能抑制大肠埃希菌，因而使致病的沙门菌、志贺菌容易分离到。
⑤ 特殊培养基（special medium）：包括厌氧培养基和细菌L型培养基等。前者是培养专性厌氧菌的培养基，除含营养成分外，还加入还原剂以降低培养基的氧化还原电势，如疱肉培养基、巯基乙醇酸钠培养基等。后者是针对细胞壁缺损的细菌L型，由于胞内渗透压较高，故培养基必须采用高渗低琼脂培养基。
（2）按性质分类：
液体：细菌增菌、接种细菌并观察生长情况；
半固体：观察动力、保存菌种；0.3~0.5
固体：分离纯化微生物、鉴定及药敏。1.5~2.0
2、培养基选择
(1) 巧克力血平板 其中含有 V和 X因子，适于接种疑有嗜血杆菌、奈瑟菌等的标本。
(2) 麦康凯平板 能否生长，是非发酵菌鉴定的一个依据。
(3) SS琼脂，用于志贺菌和沙门菌的分离。
(4)碱性琼脂或TCBS琼脂 用于从粪便中分离霍乱弧菌及其他弧菌。
(5)血液增菌培养基 用于从血液、骨髓中分离常见病原菌。
(6)营养肉汤 用于标本及各类细菌的增菌。
（二）分离培养
1、接种方法：
（1）平板划线分离法：目的是使混杂的多种菌分散生长，形成单个菌落；连续划线分离法，主要用于杂菌不多的标本。分区刘线分离法，适用于杂菌量较多的标本。
（2）斜面接种法：主要用于纯种增菌、保存菌种或观察细菌的某些特性。
（3）液体接种法(避兔气溶胶的产生)：多用于一些液体生化试验管的接种。
（4）穿刺接种法：此法主要用于半固体培养基、明胶及双糖管的接种。目的是保存菌种或者观察细菌的动力和生化反应。
（5）倾注平板法：测定兼性厌氧菌或厌氧菌的稀释定量培养和牛乳、饮水及尿液等标本细菌数时常用此方法。
（6）涂布接种法：常用于纸片法药物敏感性测定。也可用于被检标本中的细菌计数。
2、细菌的生长现象
（1）在固体培养基上
① 观察菌落 菌落特征包括大小、形状、突起、边缘、颜色、表面、透明度和粘度等。
PS：菌落colony：菌落是当细菌在培养基上分裂繁殖而形成的肉眼可见的细菌集落。
② 血琼脂上的溶血情况：
α溶血：又叫草绿色溶血，菌周培养基变为绿色环状。
β溶血：又称完全溶血，菌周形成清晰透明的环。
γ溶血：即不溶血，菌落周围的培养基没有变化；红细胞没有溶解或无缺损。
双环：上层溶血环，内层为β溶血，外层为α溶血。如产气荚膜梭菌。
③ 气味：如铜绿假单胞菌（生姜气味）、变形杆菌（巧克力烧焦气味）、厌氧梭菌（腐败的恶臭味）、放线菌（泥土味）等。
④ 色素：铜绿假单胞菌 有绿脓素和荧光素等，呈带金属光泽的翠绿色。
（2）在液体培养基中
浑浊生长：大多数细菌。
沉淀生长：少数链状排列的细菌如链球菌、炭疽芽胞杆菌。
菌膜生长（表面生长）：专性需氧菌如枯草芽胞杆菌、结核分枝杆菌和铜绿假单胞菌。
（3）在半固体培养基中
有鞭毛的细菌除了在穿刺接种的穿刺线上生长外，在穿刺线的两侧均可见羽毛状或云雾状浑浊生长，为动力阳性。无鞭毛的细菌只沿穿刺线呈明显的线状生长，为动力试验阴性。
3、培养方法：
（1）需氧培养法：临床细菌室最常用的培养方法，适于一般需氧和兼性厌氧菌的培养。置于35°C温箱中孵育18~24h。
（2）微需氧培养法：5%O2、10%CO2、85%N2。
（3）二氧化碳培养法：5%~l0%CO2环境才能生长良好。包括C02培养箱法，烛缸法，化学法。
（4）厌氧培养法：适用于专性厌氧菌和兼性厌氧菌的培养。
包括：①疱肉培养基法，②焦性没食子酸法，③厌氧罐法，④气袋法，⑤厌氧手套箱法。
好啦！今日分享就到这儿啦 搬砖人要下班了。
如果你喜欢我的分享，一定要点赞、收藏，在看，加关注哦（也可以不）。
如果你需要上一期——完整导图，后台回复【微生物07】。胖友们，关键词一定要看清楚呀！
需要本次推文导图，后台回复【微生物08】
下期分享在周二 周四 周六 周日
还想看什么？可以私信告诉我哦！
往期回顾考研英语备考怎么选到合适学校21考研双非二本上岸985经验贴
临床检验诊断学759检验综合经验贴【微生物 07】如何用5min快速复习常见病毒！