dCas9-ChIP技术示意图[2] 说回到这篇文章,作者首先设计靶向位点的sgRNA,再和dCas9-Flag一同转入细胞,然后按ChIP的方法将细胞交联后裂解,用带有Flag标签抗体的Beads将dCas9连同交联在一起的所有分子都沉淀下来,最后将DNA/RNA/蛋白质解交联并分别提取,进行 RT-qPCR、Western blot 或测序/芯片/质谱分析,就可以定量检测目标RNA/蛋白含量,或是寻找未知的结合分子。看似复杂,实则一步到位,将所有直接或间接结合的分子全部找到。私以为这样的方法非常适合寻找特定启动子位点的结合分子,不仅操作简单、高效,转入dCas9系统的细胞还能保留下来进行后续验证实验。检测结果如下图。