【热点追踪】百炼钢化作绕指柔~~解析相分离（二）

大家好，我是你们的胖师兄！又要到周末了，咱们接着来聊点热点吧！

上回书说到，这相分离是个什么玩意以及它到底有多热？（回顾：【热点追踪】百炼钢化作绕指柔~~解析相分离（一））今天咱们要聊的话题就是相分离该如何验证这一问题了，换句话说我怎么知道我想研究的分子和谁是一个团伙的而且他们还融合在了一起？

下面咱们就来看一篇10+的Nature子刊是如何研究相分离的:

该文章今年发表在Nature Structural & Molecular Biology（IF=11.98）上，别看发的比较高其实核心很简单：BRD4这个基因有一高一矮两种形式的亚型，矮子呢可以形成相分离的液滴包裹染色质进而调控基因转录。（其实就是把转录因子原本机械化的结合模式给打破了，换成了液相包裹的模式来促进转录） 

（整体思路就是这个样子，图片来源于胖师兄）

首先作者上来先比较高佬和矮子的结构，发现高佬多了个N末端，然后进行了定位研究，发现加入极性较强的物质Hex后BRD4荧光斑点少了。

剩下很多篇幅都是有关它两个亚型共定位和转录激活作用研究的，没什么新意大家自己去看看就好，我们关键来看这个BRD4相分离相关实验是怎么设计和研究的。

作者用了咱们一般都会用到的激光共聚焦显微镜就搞定了，没想到吧？你以为有多高大上？当然该说不说，这个显微镜得买贵的，分辨率太低根本看不清，先看下他的图片我在和你们慢慢唠。

上面的图就是这个研究最核心的图了，证明的就是BRD4的矮个子亚型处于一个不断流动聚合和解离的过程：

先来看A图，用的是我们共聚焦显微镜一般都会有的录像或者连拍功能，可以看到由左至右有三个小的光斑慢慢合成了个大的，随着时间来到55秒，光斑又开始解离然后恢复成三个小光斑。

B图就更能说明这个蛋白的流动性了，作者用到了荧光漂白技术，先说结果再来聊这个具体技术。他用荧光漂白技术把白框内的这个光斑中的荧光信号全部淬灭掉，也就是说这个光斑所代表的的BRD4S的蛋白还在但是没有荧光标记了，随着时间推移10秒之后这个光斑的荧光原地复活，那这些荧光信号哪儿来的呢，自然只能是游离的具有荧光信号的BRD4S带来的，以此说明BRD4S具有相分离特性，处于液态流动中。

最后我们简单说下这个荧光漂白技术，光漂白荧光恢复技术是用荧光物质标记细胞膜蛋白或膜脂质，然后以一束激光照射细胞膜,使某一部分的荧光漂白。如果膜蛋白是流动的,当停止激光照射后，漂白部位的荧光又可恢复，根据其恢复速度可以计算出膜蛋白或膜脂质的扩散速率。具体操作见下图：

（图片来源于网络）

文章里面有一个相分离条件探究，那个图片清晰度不得不服，所以有一个这样的直观图片抵得过100张花里胡哨的柱形图啊，大家一起看一看然后就结束我们今天的热点分析吧！

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