高效液相色谱-Part1：流动相

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高效液相色谱英文缩写为HPLC，全名称为：

High Performance Liquid Chromatography

但，最初它是的含义却是高压液相色谱

High Pressure Liquid Chromatography

今天我们就先讲讲流动相，对于高效液相色谱来说流动相就相当于是我们人体中的血液，在色谱系统中它起到了携带样品进入色谱系统并且在色谱柱上进行洗脱的作用。

首先，我们要说说流动相的极性。

正相色谱是做先被发明出来的，之所叫正相色谱是因为色谱柱里固定相的极性大于流动相的极性，所以正相色谱中的流动相是弱极性的。

反相色谱之后被发明出来，那就很好理解了色谱柱里固定相的极性小于流动相的极性，流动相是强极性的。

常用试剂极性

石油醚＜汽油＜庚烷＜己烷＜二硫化碳＜二甲苯＜甲苯＜氯丙烷＜苯＜溴乙烷＜溴化苯＜二氯乙烷＜三氯甲烷＜异丙醚＜硝基甲烷＜乙酸丁酯＜乙醚＜乙酸乙酯＜正戊烷＜正丁醇＜苯酚＜异丙醇＜叔丁醇＜四氢呋喃＜二氧六环＜丙酮＜乙醇＜乙腈＜甲醇＜氮氮二甲基甲酰胺＜水

虽然正相色谱先被发明出来但使用却没有反相色谱普遍。这是为什么呢？

因为反相色谱在流动相的参数上有更多的选择：不同的种类（缓冲盐），不同的pH，不同的混合比例，能更好的调节色谱的分离效果。而正相色谱在流动相上的调节参数却相当的有限，不利于化合物的分析。

流动相的制备

流动相的制备其实很简单，只要按照分析方法进行配置就可以了。大致可以分为几种情况：

1.	等度洗脱-单泵
	一般为有机相与水溶液混合液后由单泵恒流速输送
2.	等度洗脱-双泵
	一般为有机相与水溶液分别由两个泵恒定比例输送
3.	梯度洗脱-双泵
	一般为有机相与水溶液分别由两个泵变化比例输送

梯度的变化可以实现化合物更好的分离，特别是对于复杂的化合物，与气相色谱中的程序升温有相同的含义。

流动相的pH对分析的影响

pH 变化会对不同结构化合物的色谱行为产生不同的影响。中性化合物在反相色谱系统的保留与pH 无关；酸性化合物在pH 趋于酸性（pH 变小，尤其低于化合物的pka 值）时会因状态趋于中性而增加保留；而碱性化合物在pH 趋于碱性（pH 变大，尤其高于化合物的pka 值）时会因状态趋于中性而增加保留。反之，高pH 时酸性化合物保留降低；低pH 时碱性物质保留会降低。若想获得稳定的保留，对于酸性待测物而言，流动相的pH 值最好低于待测物之pka两个单位；对于碱性待测物来说，流动相的pH 值最好高于待测物之pka 两个单位。

流动相的过滤

有些人可能会这样的疑问：我配置流动相用的是都是色谱级别的试剂为何还需要过滤？

因为流动相过滤不仅能够去除流动相中的颗粒杂质，避免它们对内部密封圈造成损害，或堵塞小孔管道、线内过滤器，也可以保护色谱系统和色谱柱，延长柱子的使用寿命。也可以消除由于颗粒在色谱系统中的摩擦而引起的无规律的压力波动和基线波动，改善数据的精确度。同时也可以消除流动相中存在气泡减少对检测系统的干扰。

滤膜

既然谈到了流动相的过滤，不得不谈谈过滤的滤膜。这里介绍几种滤膜的种类和滤膜的孔径：

滤膜的种类：尼龙膜(Nylon)，聚偏氟乙烯膜（PVDF），混合纤维素酯，聚丙烯，聚醚砜(PES)，聚四氟乙烯（PTFE），C18滤膜，活性炭滤膜等。用的比较多得是尼龙膜(Nylon)，混合纤维素酯，C18滤膜，活性炭滤膜。其中尼龙膜(Nylon)和混合纤维素酯起到了去除颗粒杂质的作用，C18滤膜和活性炭滤膜还可以去除流动相中一些有机物的干扰。

滤膜的孔径：一般有0.1μm，0.22μm，0.45μm，0.65μm，1.2μm这几种，一般建议HPLC用0.45μm的滤膜就可以了，而对于UPLC必须使用0.22μm的滤膜过滤流动相，因为UPLC的管径更细，UPLC色谱柱的粒径更细，更容易引起堵塞。

添加剂

对于流动相，有时还是还会加入一些添加剂：比如说氨类改善化合物的峰形；比如说离子对试剂，离子对试剂又分为酸性和碱性：

用于酸性化合物：四丁基氢氧化铵（10%水溶液），四丁基溴化铵，十二烷基三甲基氯化铵；用于碱性化合物：戊烷磺酸钠，己烷磺酸钠，庚烷磺酸钠，辛烷磺酸钠，癸烷磺酸钠等 

简简单单的流动相里也有大大的学问，不要认为它只是简单的试剂混合就忽视它的重要性。

还有最重要的是，要记得点赞哟！！！