向“真”而生！天昊生物AccuITS真菌绝对定量测序服务重磅上线

宏基因组 2023-02-16

The following article is from 上海天昊生物 Author 上海天昊生物

向“真”而生，只为更好！为了让客户获得更真实、更丰富的真菌多样性检测结果，天昊生物创新型技术--AccuITS^TM真菌绝对定量测序，今天终于跟大家见面啦！这是继天昊生物推出Accu16S^TM细菌绝对定量测序服务两年多后，再一次迎来天昊微生物多样性检测技术的重磅升级！

创

新

型

技

术

微生物多样性检测长期以来存在两大问题：一个是常规微生物扩增子测序数据通过抽平后，只能获得微生物群落组成的相对比例，这种处理造成样本微生物数量信息的丢失，无法真实反应样本中实际菌群的绝对拷贝数。另一个是目前研究常用qPCR绝对定量和常规扩增子测序的联合策略来获得菌群绝对丰度和微生物群落结构，但是qPCR绝对定量技术对样品质量要求较高，尤其对PCR抑制剂敏感，而这又是土壤和肠道粪便等样本无法完全去除的，这也导致qPCR绝对定量的结果不够准确。

面对上述两大问题，为了能够得到更加真实的检测结果，天昊生物在无市场同类技术服务情况下，持续人力物力投入，成功研发出微生物扩增子绝对定量测序的独创型技术服务。该方法通过向样品DNA中添加一定量人工合成内参标准品序列，进行扩增子文库构建及二代高通量测序，再根据内参标准品测序序列数及其绝对拷贝数绘制标准曲线，最终计算出样品中OTU代表序列对应微生物菌群的绝对拷贝数。

在2019年，公司成功推出了Accu16S^TM细菌绝对定量产品，市场反响热烈。至今公司检测项目累计已经超过百项。根据2020年发布的影响因子统计，天昊客户同期使用Accu16S^TM细菌绝对定量技术，比使用常规16S扩增子相对定量发表的文章影响因子平均高1.8分，提高幅度达48%，这也从学术产出角度表明我们的Accu16S^TM细菌绝对定量技术得到了更高水平杂志的认可。

表1、Accu16S^TM细菌绝对定量测序部分客户文章列表

（客户文章集锦手册可留言索要）

在实际的项目洽谈中我们发现，有很多老师更关心真菌而不是细菌菌落组成及丰度，有的则是以真菌与细菌为共同的研究对象，来探讨它们之间的互作关系，这些老师都要求检测真菌的绝对定量。我们克服了诸如样本真菌ITS拷贝数通常较低、非特异片段扩增较多、实验稳定性与准确性要求更高等技术难点，成功研发了AccuITS^TM真菌绝对定量测序技术。

技术简介

AccuITS^TM真菌绝对定量测序技术通过向样品DNA中添加一定量spike-in standards人工合成序列，进行ITS扩增子文库构建、测序，再根据spike-in standards 的ITS扩增子reads数及其绝对拷贝数绘制标准曲线，计算出样品中OTU代表序列对应真菌物种绝对拷贝数。添加spike-in DNA到样品模板中进行ITS扩增子高通量测序较好的解决了样本中微生物的绝对定量问题，同时也能得到样本中的物种组成信息。

技术优势

◆数据量大：平均10万reads/样品，可检测环境微生物群落中的痕量菌，以及发现新的微生物。

◆方案经济便捷：单个真菌ITS扩增子测序可同时获得环境样本中微生物的组成信息和绝对定量数据。

◆适用范围广：运用真菌绝对定量可得到环境样本中绝大多数优势真菌物种的绝对定量数据，该方法具有普遍适用性。

◆真实、准确：绝对定量数据，测序结果真实，客观还原菌群结构及丰度比例，无样品偏差可直接比较。

应用领域

√ 微生物菌种绝对定量

√ 环境与生态研究

√ 微生物菌群进化分析

√ 微生物菌群丰度分析

技术参数

分析内容