【直播课干货集锦】|| 菌菌课后笔记之关于生物被膜的16问与全面解析！！
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生物被膜(Biofilm，BF)也称作“生物膜”或“菌膜”，是一些微生物细胞由自身产生的胞外多聚物基质（主要为多糖）所包围而形成，且附着在浸有液体的惰性或生物表面的，具有结构的群落，是细菌的一种生存策略，在合适的条件下99%的细菌都可以形成生物被膜。
但是过去对生物被膜的研究很少，大家对病原菌的关注主要在耐药性的问题上，近来研究发现生物被膜是导致感染性疾病久治不愈，造成微生物产生多重耐药性的原因之一，越来越多的生物和材料生物科学投入这一研究。
今天就给大家介绍一下生物被膜是如何形成的，以及目前常用的实验室检测方法。
生物被膜是如何形成的呢？
它的形成过程可以分为五大步骤：
①微生物粘附
②微生物菌落形成
③胞外聚合物包裹
④生物被膜成熟
⑤微生物脱落与再定殖。
由于生物被膜成为研究的焦点，就需要一定的检测手段。目前实验室常用的检测方法有结晶紫染色法和显微镜观察法。
结晶紫染色法操作简单、成本低廉，是目前测量菌膜生成量最常用的方法。流程是微生物先在微孔板中进行培养形成生物被膜后，然后用1%的结晶紫染色，再用乙酸进行脱色，通过测量洗脱结晶紫后脱色液的OD值来直接确定菌膜的形成量。
图2 结晶紫染色生物被膜
显微镜观察法操作较为繁琐、成本高，但能很好地观察生物被膜的空间结构和形态差异。同样是先在微孔板上培养生物被膜，然后通过细菌死活染色方法对生物被膜进行染色，在激光共聚焦显微镜或者荧光显微镜下观察生物被膜的厚度及死活比例有无变化。
图3 激光共聚焦显微镜观察生物被膜
生物被膜公开课问题解答
小A
生物膜和活性污泥有什么区别？小C
在做共聚焦显微镜，利用syto9染色时，生物被膜应该如何染色，如何预处理，才能获得比较好的结果？小D
生物被膜的结构成分分析方法有哪些？
显微镜观察法，即通过对生物被膜染色，然后使用激光共聚焦显微镜或者荧光显微镜进行直接观察。
小E
不能形成EPS的金葡菌株为什么也会形成生物被膜？
按照微生物的特性来说，在合适的条件下99%的细菌都可以形成生物被膜，只是不同菌株在不同环境下形成的生物被膜致密性或厚度不同而已。
小F
如何确定生物被膜在96孔板上的具体生长位置？
可以通过对生物被膜进行结晶紫染色，由于生物被膜被结晶紫染上色，而浮游的微生物已被洗掉，这样就能够使生物被膜生长位置被可视化。
小U
清洗悬浮细胞是否会对新生生物膜产生损伤？
会造成一定的损伤，建议清洗液加入时，力度应该尽可能地轻柔。
小M
一般多久才能长出需要的厚度呢？
小K
厌氧菌和好氧菌生物被膜的检测方法有不同吗？
小Q
共聚焦可以用来判断死活细菌？
判断死活细菌可先对细菌进行死活染色，然后再利用共聚焦显微镜进行观察。
小S
结晶紫染色可以不在板上吗？比如在钢片上
结晶紫染色主要是针对生物被膜染色，不论生物被膜在什么载体上培养。
小R
所有细菌都可以形成被膜么？
在合适的环境下，原则上几乎99%左右的细菌均可形成生物被膜，不过形成生物被膜的厚度和致密性有一定的差异性。
小W
生物膜样品怎么保存能较长时间内去测其活性，还是只能采样之后马上测？
建议生物被膜样品现采现测，这样能保证生物被膜原有的形态和微生物的死活情况。如果想尽可能保存完好的生物被膜情况，建议冷藏（2-8℃）保存运输。
小T
生物被膜会自动解离吗？
小X
做扫描电镜怎么取的被膜呢？要离心下来么？
小Y
做共聚焦怎么取生物膜？
生物被膜培养好之后，是可以直接染色处理，然后拍摄激光共聚焦。
小Z
有没有什么方法可以看到生物被膜3D结构？
生物被膜3D结构的观察可以通过对生物被膜染色，然后拍摄激光共聚焦显微镜来完成。
通过Dr.Zheng精心整理的课后答疑环节，大家是不是对于公开课学习过程中存在的问题、疑惑都豁然开朗，了然于胸了呢？🤭
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