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【年度总结】6种细胞凋亡测定方法!
细胞凋亡是程序性细胞死亡的高度调控形式,在多细胞生物发育过程中、整个生命周期以及对细胞应激作出反应时均可发生细胞凋亡。核固缩、细胞皱缩、质膜出泡和 DNA 断裂是细胞凋亡的典型特征。
Caspases 蛋白水解酶家族充当着细胞凋亡的中心调节因子,而其活性又由多种其他促凋亡和抗凋亡蛋白所平衡。细胞凋亡的失调发生在多种疾病(包括自身免疫性疾病、神经退行性疾病和癌症)中,并且是这些疾病的病理机制之一。因此,了解这些疾病的细胞凋亡过程有利于疾病治疗的研究进展。
尽管目前有好几种检测细胞凋亡的方法,但要根据您的实验模型选择合适的检测方法。例如:
对细胞悬浮液进行 Annexin V 染色后,通过流式细胞仪可以有效地识别细胞凋亡早期脂质双层的变化。但是,这种检测不太适合完整的组织标本,否则结果难以量化和解释。 相反,其他细胞凋亡标记,如 Cleaved Caspase-3 和核酶多聚二磷酸腺苷核糖 (ADP-ribose) 聚合酶 (PARP),更适合用传统的免疫组织化学方法在组织切片中检测。
使用 DNA 染料染色(例如 DAPI 和 Hoeschst 33342)来观察染色质凝聚。 使用末端脱氧核苷酸转移酶介导 dUTP 缺口末端标记法 (TUNEL) 检测以及其他亚细胞定位标记(包括 细胞色素 C 从线粒体到细胞质的转位)确定 DNA 链断裂和碎片裂解。 此外,线粒体膜电位本身是细胞健康状态的关键指标,其损耗与非活性、功能失调的线粒体,因此,它是细胞凋亡的早期指标,可以在与细胞可渗透阳离子染料 TMRE(四甲基罗丹明乙酯)孵育后进行检测。TMRE 通常在健康完整线粒体中累积,因此,当线粒体膜电位被破坏时,荧光强度降低。
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