国际期刊综述：多频次输注免疫细胞，可提高肿瘤患者生存质量，延长生存期
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撰文｜摩西
编辑｜南风
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细胞王国·主编/ 摩西
细胞生物技术公益科普者
推广生命科学的通识认知
结直肠癌(CRC)是第三大最常见的癌症，也是癌症相关死亡的第二大原因，根据2018年的数据显示，估计有180万新病例，近88.1万人死亡。大多数结直肠癌患者在确诊后已经进入晚期(III、IV期)。III期病例是治愈率较好，但当癌症转移到远处(IV期)时，能治愈的概率较为渺茫。随着各国学者对免疫细胞在癌症治疗中的探索，也为结直肠癌患者带来了一线生的希望。
图片源自：腾讯医典
近年来，自体免疫增强疗法吸引了许多科学家的注意。在过去的二十年中，自体免疫细胞疗法在癌症的辅助治疗中越来越普遍。自体免疫细胞输注已被证明对癌症治疗是安全的，当与传统放疗，化疗或手术联合使用时，疗效提高约30%。细胞免疫疗法成功应用的关键方面是获得足够数量的免疫细胞，来根除肿瘤细胞并且不影响体内的其他细胞。
在越南时代城国际医院近期发表于《国际分子科学杂志》上的一篇题为“Evaluating the Safety and Quality of Life of Colorectal Cancer Patients Treated by Autologous Immune Enhancement Therapy (AIET) in Vinmec International Hospitals”报道中，研究者评估了12例（8名男性和4名女性） III 期和 IV 期结直肠癌患者，接受不同数量的自体免疫细胞输注后的安全性、有效性以及生存期延长等情况。一起来看看该研究的具体的实施流程和结果。
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病人入组前的特征
患者的中位年龄为59岁(从52.1岁到71.2岁不等)。在该研究患者队列中，7名患者表现出组织转移，5名为非转移患者。术后 AIET 平均持续时间为15.7 ± 7.45个月。
本研究纳入患者的详细情况
免疫细胞扩增能力
本研究中的患者接受不同频次的免疫细胞输注，通常为1至4次输注。PBMNC 的分离、免疫细胞提取和培养均在符合 ISO-14644 认证的净室中进行。通过 Ficoll-Paque 密度离心分离 PBMnCs，然后分成两个相等的部分，一个用于NK细胞扩增，另一个用于CTL扩增。
NK细胞的平均百分比为11.6% ，平均细胞数为2.6×106，介于0.59至4.46×106之间。CTL平均百分比为25% ，平均细胞数为6.48×106，介于1.73~22×106之间。
CTL和NK的扩增。(A)培养D0和D14时CTL和NK细胞的形态。细胞在对数生长期时以簇状生长。(b)外周血来源的CTL和NK细胞扩增后的免疫表型。
扩增20-21天后，NK细胞和CTL细胞数量明显增加。在NK细胞数量在1.2 ~ 21.3×109之间，平均为8.8 × 109，占细胞总数的85% 。在 CTL细胞数量在0.1至13.3×109之间，占62.4%，平均细胞数为6.6 × 109。检测支原体、细菌和真菌均为阴性。内毒素水平<0.5EU/mL。
培养前后 NK 细胞平均数
培养前后的 CTL细胞平均数
在患者的外周血中，按年龄划分的NK细胞百分比呈现显著差异，60岁以下患者为29% ，60岁以上患者为21%，按疾病分期，III 期患者为28% ，IV 期患者为22%。此外，III期患者的 CTLs 数量显着高于IV 期患者(8.58×106 vs 4.52×106)和无转移患者(8.0×106 vs 4.61×106)。
经过20-21天的培养，CTL的总数在不同的疾病阶段有显著差异，III期患者(8259± 3370×106)的CTL 数量高于IV期患者(5113±3666×106细胞)和发生癌转的患者，检测到发生转移的患者为4858±3893×106细胞，无转移患者为8073±3178×106细胞。
此外，年轻患者的CTL比例为69% ，而老年患者的比例为56%。同时，女性CTL的百分比比男性高20% (79% vs 59%)。NK细胞的扩增在年龄、疾病分期或肿瘤转移方面无显著差异。
预扩增的免疫细胞与患者年龄、疾病分期和癌转移的相对关系
扩增后的免疫细胞与患者年龄、疾病分期和癌转移的相对关系
经体外扩增细胞输注的安全性
对12名结直肠癌患者进行免疫细胞输注，平均输注频次为2.5次。在收集患者外周血的过程中，没有观察到不良事件，在输注 NK 细胞和 CTL 期间也没有发生严重不良事件。
参与这项研究的所有患者的平均生存期为32.6 ± 16.3个月(2.72年)。因此，研究结束时观察到平均生存期增加了14.3 ± 14.1个月。结果显示，实际存活时间和估计存活时间之间存在统计学显著性差异。截至2021年12月，共有5名患者死亡，7名患者存活且未复发，生存质量良好。
患者的生存期
最后一次评估的生存时间、患者状况和死亡原因
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受试者的生存质量
免疫细胞输注前后症状的变化
比较输注前和输注后MDASI-GI项目的平均（±标准差）分数。疲劳、疼痛、睡眠障碍、悲伤和食欲不振是五个最严重的症状。输注后，患者报告所有体征均有明显改善。呕吐、恶心、口干、苦恼等症状明显减轻，差异有统计学意义（p≤0.05）。
依据MDASI-GI评估的症状改善情况
至于结直肠癌的症状，除了感到肿胀外，其他症状在输液后均有显著改善。关于症状的“反应”维度，8例患者在一般功能、情绪、工作、与他人相处以及行走和享受生活的能力方面的障碍明显减少。
注射免疫细胞前后病人生存质量的变化
截至2021年12月，12例患者中有7例(58%)无复发且存活和生活质量良好，在症状量表方面，疲劳、恶心呕吐、呼吸困难、便秘等，有显著改善（p≤0.05）。然而，疼痛、失眠、食欲不振和腹泻等症状仍然是患者健康的负担。
对照EORTC QLQ-C30评估生活质量的变化
研究人员进行了一项多元分析，调查了 HRQoL与年龄、性别、疾病分期和生存期(存活三年以上和存活三年以下的患者)之间的关系，以揭示患者因素对健康状况的影响。具体来说，存活3年以上的患者的身体机能评分比存活3年以下的患者高29.84% (p<0.05)。
AIET前全球健康状况的多因素分析
最后，研究小组对于本项研究结果进行了评估总结，参与研究的受试患者的平均生存期，与入组时的预估生存期相比，存活率提高了约1.8倍。这一结果相对高于其他出版物，该项研究的1年存活率是83%。因此，免疫细胞疗法可能是提高CRC存活率的一个解决方案。
鉴于参与该项研究的患者数量较少，并且缺乏一个对照组。研究小组计划与对照组一起进行追踪调查测试，以得出更准确的结论。此外，生物标志物的确定，以预测更好的治疗反应。PD-L1表达已被证明是癌症治疗敏感性的预测性生物标志物，研究小组还将在随后的研究中使用 AIET 测定癌症患者的PD-L1水平。
主编随笔：
CTLs和NK细胞在全球范围内受到高度关注。在Subramani等人发表了一份病案报告，参与受试的结肠癌患者接受了一线化疗药物和6次输注的AIET [2]。这个患者在治疗期间和第一次输注AIET后8个月的随访期间没有不良反应。
2014年，Subramani 等[3]报道了4例 IV 期结肠癌患者接受了48×106个外周血单核细胞和2700×106个细胞量的NK和T细胞静脉输注。结果显示癌症标志物显著降低，生活质量改善，生存率显著提高(23个月)。
所以我们有理由相信，随着更多相关研究的开展，医学人员将获得更好的免疫细胞治疗方案，以攻克癌症。
参考资料：
参考资料：
1、doi.org/10.3390/ijms231911362；
2、Subramani, B.; Ratnavelu, K.; Pullai, C.R.; Krishnan, K.; Sugadan, S.D.; Deng, X.; Hiroshi, T. Autologous Immune Enhancement Therapy: A Case Report of a Stage IV Colonic Cancer. Oncol. Lett. 2013, 5, 1611–1614；
3、Subramani, B.; Pullai, C.R.; Krishnan, K.; Sugadan, S.D.; Deng, X.; Hiroshi, T.; Ratnavelu, K. Efficacy of Ex Vivo Activated and Expanded Natural Killer Cells and T Lymphocytes for Colorectal Cancer Patients. Biomed. Rep. 2014, 2, 505–508.
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