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给你找来了清华大学·圆二色谱课件,你看还是不看?
圆二色谱简介
圆二色光谱的英文名称为CircularDichroism,简称CD光谱。其光谱仪的基本测试原理是:通过入射圆偏振光的波长变化,测定手性样品的左圆偏振光和右圆偏振光摩尔消光系数之差Δε。
由于CD光谱反映了光和分子间的能量交换,因而只能在有最大能量交换的共振波长范围内测。CD光谱可用于分析一般电子光谱所不能体现出来的能级跃迁的细节,是讨论手性化合物电子跃迁性质的重要表征手段。
当测试条件严格一致时,一对对映异构体的CD光谱呈镜像对称。通常采用光学纯的样品(即仅含单一对映体)进行CD光谱的测定,可由实验值θ根据浓度c、光程长l求出该纯样的Δε。
在严格相同的测试条件下,测定未知样品的CD光谱,可根据实验值求出未知样的Δε’。根据上述数据可估算未知样品的对映体过量值(EnantiomericExcess,简称ee%)。
当样品溶解性差、溶剂背景干扰、溶解过程中绝对构型发生变化时,固相CD光谱测试很有必要。通常对纯样进行CD光谱的测试,可在样品绝对构型与CD信号间建立关联。对同物质未知ee%值的样品,可通过CD光谱,简单判断其哪种对映体过量。
此外,光谱还可结合其他结构表征手段用于关联确定手性化合物的绝对构型,或检测靶向分子与DNA等生物大分子的相互作用。
圆二色性的存在将通过该物质传播的左、右圆偏光变成椭圆偏振光。并且只在发生吸收的波长处才能观察到。
圆二色性的表示
CD
CD能够提供的信息:primarystructure;secondarystructure,tertiarystructure
样品要求:1、样品必须保持一定的纯度不含光吸收的杂质,溶剂必须在测定波长没有吸收干扰;样品能完全溶解在溶剂中,形成均一透明的溶液;
2、氮气流量的控制;
3、缓冲液、溶剂要求与池子选择:缓冲液和溶剂在配制溶液前要做单独的检查,看是否在测定波长范围内有吸收干扰,看是否形成沉淀和胶状;在蛋白质测量中,经常选择透明性极好的磷酸盐作为缓冲体系;
4、样品浓度与池子选择样品不同,测定的圆二色光谱范围不同,对池子大小(光径)的选择和浓度的要求也不一样。蛋白质CD光谱测量一般在相对较稀的溶液中进行。
J-810圆二色光谱仪结构图
S1-S2:第一级单色器;S2-S3:第二级单色器;M:球面反光镜;P:晶体石英棱镜;L:透镜;F:滤光器
常见问题
哪些物质需要收集CD光谱?CD光谱可以提供哪些信息?
CD光谱的测量条件:在给定波长范围内有较强的CD信号和合适吸收值的手性物质。
CD光谱提供信息:圆二色谱在有机化合物结构鉴定中有着广泛的应用。可见及近紫外作为入射光源,这就要求被研究的手性分子要具有发色基团,通过对发色基团的研究来获得分子结构信息,因此它只能提供分子局部的结构信息。主要用于测定蛋白质的立体结构圆二色性R和L两种圆偏振光吸收程度不同的现象。
圆二色谱是一种测定分子不对称结构的光谱法。在分子生物学领域中主要用于测定蛋白质的立体结构,也可用来测定核酸和多糖的立体结构。
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本次圆二色谱干货包含以下内容:
1
数据处理
【ADF教程:如何计算电子圆二色谱】
【CD圆二色谱数据处理操作说明】
2样品准备及实验
仪器操作
原理
【清华大学-圆二色谱课件】
【圆二色光谱仪原理应用】
【圆二色谱CD原理】
【圆二色谱】
【圆二色谱资料】
5应用
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