流式细胞仪和“尊享版”单细胞互动式服务：-80度冰箱里多年宝藏的终极伴侣！
听，墙上的时钟滴答滴答的走着
那是时间的声音！
对于时间来说，
一切都是他能去催化的东西，
你的容貌，你的声音，你的记忆，
还有
......
你放在-80度冰箱里好几十个月珍贵样本的RNA质量
我们做单细胞的最怕的就是RNA质量不好了，因为当RNA发生降解或者RNA质量不好的时候，会发生以下情况：
1. 基因中位值整体偏低；
2. 捕获的细胞数偏少；
3. 目的细胞类型的缺失等。
所以这个时候有一道你不能跨过的天堑跨在你和单细胞测序中间,
那如何在这座天堑上修建大桥跨越过去呢？
我们不得不夸下来自钱塘江边的根正苗红的传承了中华民族传统美德的能创造大自然奇迹的联川生物，我们誓将这个不可能变成鬼斧神工的可能。
那么我们是怎么做的呢？
01.确认样本整体质量的可行性
对于半年内的样本，我们要避免一些由于意外保存不当或者温度突变导致的RNA降解，我们通过采取一小部分的组织提取RNA，看RNA质量（RIN）是否保持在高位，如果RNA质量保存在高位的情况（如图1）下，说明这个样本适合接下去做单细胞抽核实验；如果RIN值很低（如图2），则说明这个样本存在较大的风险，不建议大家往后走。
02.确认抽核过程中核的完整性
当样本的保存时间变长，并且过程中有复温的情况下，可能会造成原本的细胞结构发生变化，导致细胞核的形态变化以及核膜的破裂，最终促使核内RNA外流，那么如何解决呢？通过流式，我们将符合细胞核形态的核通过流式细胞仪中FSC和SSC两个参数将合适的细胞核大小筛选出来，并借助PI对DNA的染色将流式下荧光偏弱的核膜不完整的细胞核剔除出去（如图3），确保上机的细胞核完整，RNA含量不外露至核外；
03.确保单个细胞核内RNA质量处于高位
通过RNA整体质检和PI染色，我们基本上能够把大部分低质量的细胞剔除，但是很多时候在RNA整体过关且细胞膜完整的情况下，还是会有一些会是RNA降解，那么如何将这些含有大量降解RNA的细胞核筛选出来呢？我们借助一种叫做RNASelect的RNA示踪试剂来看RNA的完整性。
04.生信手段的保驾护航
当实验方法都没办法把这些糟糕的样本给搞定的时候，生信是我们的最后一道关卡。联川生物于2022年7月1日正式推出了“尊享版”单细胞互动式服务，针对互动式服务，我们更新了全套的流程代码，将CellRanger和Seurat更新到了最新版，来维持call cells和细胞过滤的最高性能外，还在流程中加入了CellBender等去背景软件，让你的数据呈现最完美的样子，挖掘出最令人兴奋的数据。
最终成果
（数据来源于联川生物单细胞研发中心的心脏测试样本）
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