两连发！高质量标记试剂IBT-16plex助力定量蛋白质组学研究

基于同重同位素标签（Isobaric tags）的肽段标记技术具有通量高、重现性好、能够处理复杂样本以及微量样本，且可以同时进行定性和定量分析等优点，已成为支撑蛋白质组学研究的关键技术之一。

近日，两篇IBT标记定量蛋白质组学相关文章发表在分析化学领域权威期刊Analytical Chemistry（IF=8.008）上。

华大基因刘斯奇研究员团队与南京谱利健生物技术有限公司李舒伟博士团队合作发表了题为“New Set of Isobaric Labeling Reagents for Quantitative 16Plex Proteomics”^[1]的文章，报道了新一代同重同位素标记试剂IBT-16plex可同时对多至16个样品进行标记，不仅提高样品分析通量，同时提高了蛋白质鉴定率及定量准确性。

复旦大学张旭敏研究员团队提出了一种三重混合超通路方法，将IBT-16plex与TMT-11plex和TMTpro-18plex三种类型同重同位素标签试剂组合，进一步扩大检测通量，相关成果以题“Hyperplexing Approaches for up to 45-Plex Quantitative Proteomic Analysis”^[2]也发表于Analytical Chemistry。

01

与TMTpro-16plex相比，

IBT-16plex在定性、定量方面均表现卓越

IBT-16plex是在DiART^[3]或IBT-10plex^[4]基础上设计和合成的同重同位素标记试剂。系统优化和全面评估证明了IBT-16plex标记方法用于蛋白质组定量分析的可靠性和准确性。

图1 IBT-16plex优化及性能比较流程图

与TMTpro-16plex相比，IBT-16plex鉴定到的肽段和蛋白质数目分别提高了14.8%和8.6%；定量方面，在较小肽段比例如1:200倍范围内，IBT-16plex压缩效应小于TMTpro-16plex。这些结果均证实了IBT-16plex用于蛋白质组定量分析的强大优势。

图2 IBT-16plex与TMTPro-16plex性能比较结果

02

IBT-16plex、TMT-11plex和TMTpro-18plex三种试剂联用，进一步扩大检测通量

目前的大队列生物学和临床研究需要高通量的定量方法。以IBT-16plex、TMT-11plex和TMTpro-18plex三种试剂为研究对象，两种试剂和三种试剂的组合分别可以达到最大34-plex和45-plex定量。

图3 三种标记定量试剂联用概览

首先确定标记效率和优化检测条件，随后系统评估了不同试剂在独立分析和组合分析中的识别和量化性能。TMT-11plex在识别能力、IBT-16plex在兼容性、TMTpro-18plex在复用能力等方面各具独特优势。三种试剂组合中共有蛋白质和肽段分别为65.4%和28.4%。两种测试组合时，蛋白质和肽段水平共有鉴定数约77%和46%。定量分析表明，TMT-11plex与TMTpro-18plex由于存在共享通道，在联用时会稍微降低定量准确性；而IBT-16plex与TMT-11plex或TMTpro-18plex具有不同的通道，因此IBT-16plex在与TMT-11plex或TMTpro-18plex联用时，定量准确性和精密度方面均表现出更好的兼容性。

总之，此研究表明不同同重同位素试剂的联合使用是有效可行的，可以将单次检测通量提升至34-plex和45-plex。同时，IBT-16plex具备与TMT-11plex和TMTpro-18plex相似的定量准确性和精度；且由于其具备独特的报告离子通道，在组合使用时可作为首选的试剂组件。

图4 三种标记定量试剂联用鉴定和定量结果（左右滑动查看）

科技君点睛

基于质谱的标记类定量是一类应用较为广泛的蛋白质组学定量技术，华大基因在此领域深耕多年，具有严格的质控体系和丰富的项目经验。华大所提供的IBT-16plex一批次可标记多至16例样本，降低了样本的批次效应，且具备优越定性定量能力。

为了满足大规模队列分析中不断增加的样本量的需求，此次更是重磅推出IBT-16plex和TMTpro-18plex联用的34-plex标记定量，单次检测通量高达34例样本，具备高稳定性和准确性。

此外还有iTRAQ标记定量、DIA非标记定量等多种类型蛋白质组学定量服务可供选择，满足广大科研工作者的不同需求。

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参考文献（向下滑动查看）：

[1] Ning X, Li Q, Zi J, Mei Z, Liu J, Zhang Y, Bi M, Ren Y, Liu X, Lv C, Yao H, Sun J, Rao F, Li S, Liu S. New Set of Isobaric Labeling Reagents for Quantitative 16Plex Proteomics. Anal Chem. 2023

[2] Wu Z, Xiang W, Huang L, Li S, Zhang X. Hyperplexing Approaches for up to 45-Plex Quantitative Proteomic Analysis. Anal Chem. 2023

[3] Chen, Z.; Wang, Q.; Lin, L.; Tang, Q.; Edwards, J. L.; Li, S.; Liu, S. Anal. Chem. 2012, 84, 2908-2915

[4] Ren, Y.; He, Y.; Lin, Z.; Zi, J.; Yang, H.; Zhang, S.; Lou, X.; Wang, Q.; Li, S.; Liu, S. Anal. Chem. 2018, 90, 12366-12371

供稿：宁小莲、Carol

编辑：市场部

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