细胞荧光怎么定量？快来，又发布高分神器啦！

总觉得将荧光图放在文章中，瞬间就找到了高大上的感觉！

上回我们给大家分享了如何用ImageJ计算划痕面积、细胞计数以及western blot蛋白定量等神器技能，我们收到了许多研友们的积极反馈，感谢大家对我们的鼓励和支持！

今天我们将继续给大家分享一项后台呼声最高的科研必备技能—ImageJ之细胞荧光定量（简单6步，保证你能学会哦）

以计算下图荧光强度为例（同一条件下拍摄）：

1、导入图片：File→open：打开要测量的荧光图

2、转换图片格式：Image→Type→16-bit (调成灰度图片，此步骤非常重要，但可根据需要调成8或32bit)

3、设置需测量参数：Analyze→Set Measurements

在弹出的设置选项框中勾选测量对象：1面积（Area）；2平均灰度值(Mean)；3累积光密度(IntDen)后，点击OK

（PS：累积光密度=面积x平均灰度值，即：IntDen=Area * Mean）

4、调出ROI Manager界面：Analyze→Tools→ROI Manger

5、在图片上选择测量对象（带荧光的细胞以及背景）并计算

a 点击主界面的套索工具

b 点击test1图，用套索工具在图上勾画出一个荧光细胞轮廓后，在ROI Manager界面点击Add,在下图框2处会出现一个对象，点中后选择框3的Rename,重命名对象，因为是测量的第一个细胞，此例按顺序重命名为1点击OK

c 按照步骤b继续用套索工具在test1图上勾选出多个测量对象，并按照顺序以及目的重命名，如：本例勾画了6个待测对象以及3个背景对象，如下图所示，选择好对象后，在ROI Manager界面中的框1处，按住shift键选择所有测量对象，然后点击框2处Measure

d点击Measure后，弹出下框结果值，其中Area列举了每个对象的面积； Mean为每个对象的平均灰度值； IntDen表示为每个对象的累积光密度

6 、整理数据

将步骤5得到的结果图拷贝至EXCEL表格中，由于1-6号为待测细胞，7-9号为背景对象，我们求出背景7、8、9的平均光密度后，

校正后的累积光密度=累积光密度-待测细胞面积*背景平均光密度

即IntDen(校正)=IntDen-Area*Mean(背景)

7、同理重复上述步骤继续测量test2或其它图片的荧光强度

将得到的结果进行整理，即可做出用于发表的图片啦，当然为了结果尽可能的准确你需要选取更多的测量对象

这次分享的ImageJ新技能，你学会了吗？你们还有哪些技能想要get呢？欢迎文末留言，小张团队将继续为您分享神器技能笔记！

Image J软件下载地址：

链接：http://pan.baidu.com/s/1o83LiEQ 

密码：2ojb

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参考文献：

Ramanathan S P, Helenius J, Stewart M P, et al. Cdk1-dependent mitotic enrichment of cortical myosin II promotes cell rounding against confinement.[J]. Nature Cell Biology, 2015, 17(2):148-59.

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