懒人神器教你如何细胞计数，告别血平板和计数器

上一回，我们讲了如何用ImageJ计算细胞划痕面积，有很多同学后台留言，问各种应用，例如细胞计数，免疫组化结果统计，transwell ，流式细胞周期统计以及凋亡相关实验应用等，本仙将为大家一一解锁。

数细胞就像数星星

今天我们就来细致的学习一下：ImageJ之细胞自动计数

为什么要讲这个细胞计数呢？因为不想如下这样啊，眼都花了！！！

看着上面漂亮的细胞荧光图，有没有心动，这些图我们该如何计算细胞呢？

Image J细胞计数，简直就是懒人神器，简单5步走，细胞计数就是这样简单，告别肉眼苦计，告别计数器，科学又快速。

以下图为例：

1、导入图片：File→open：打开要测量的荧光图

2、转换图片格式：Image→Type→8-bit (调成灰度图片，此步骤非常重要，必须转换)

3、调节图像阈值，选择定计数对象：Image→Adjust→Threshold

a勾选框1中的黑色背景（如果待计数图像为白色背景则不需要勾选），计数图像变为下图：

b 将框2中参数选为红色，即：Default→Red

c 适当调节框3中的滚动条，细胞显示红色即为选中的计数对象

PS：一般默认即可，如果有干扰可在默认值的基础上左右微调,余下步骤还会对计数对象进行筛选

d 点击框4应用：Apply, 图像变为下图：

4、分开黏连细胞：Process→Binary→Watershed

PS：此处图示不如在电脑上明显，加上此步骤后会提高计数准确度        

5、结果分析：Analyze→Analyze Particles

框1中的参数与待计数的细胞大小有关，可自己摸索设置，本例10X物镜拍摄，设置成150-Infinity时，边缘未过半的细胞将不被计数；

将框2中Display Results、Summarize以及Add to Manager打钩

将框3中Show值参数改为Outlines

最后点击OK

6、结果出来啦:

左上图蓝黑色圆点即为计数的细胞，右上为计数细胞示意图，上图红色框内的数值即为我们测得的细胞总数。

PS：在第5步中，如果框1参数设置过小，某些非细胞物质以及图片边缘只漏出丁点痕迹的细胞也会被计数；相反如果参数设置过大，很多细胞将会被漏数。

此时可采取：

a 关掉结果示意图及上述“Results”以及“Summary”，如下图所示：

b 清除计数结果：Analyze →Clear Results

c 点击计数图片，计数图片将自动恢复至第4步，即白底黑点图：

d 再回到第5步重新设置其框1中的数值，重新计数。

本文分享完了，你学会了吗？

软件下载地址：

链接：http://pan.baidu.com/s/1o83LiEQ 密码：2ojb

Image J的其他懒人功能等待本仙一个一个解锁吧！

相关阅读：

参考文献:

• Circular Non-Coding RNA HIPK3 Mediates Retinal Vascular Dysfunction in Diabetes Mellitus[J]. Circulation, 2017

• Perfluorocarbon nanoparticles enhance reactive oxygen levels and tumour growth inhibition in photodynamic therapy. Nature Communications, 2015

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