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ImageJ 之Western blot 半定量分析
ImageJ 针对Western blot 结果分析也是生物医学类科研中常用到的技能之一。我们常见文章的western blot结果中会给出目的蛋白条带,同时附带有内参蛋白条带,有的期刊审稿人要求我们量化结果。
那么如何使用ImageJ对western blot 结果进行量化分析呢?请见以下步骤:
Step 1: 在ImageJ 中打开western blot 结果图片。
Step 2: 选择矩形工具,并且选择条带区域。
Step 3: 通过选择 Analyze -- Gels -- Select First Lane,看到选择区出现1.。
Step 4: 通过选择 Analyze--Gels--Plot Lanes,出现对应峰图。
图4:内参蛋白峰值图
Step 5: 每个峰的面积代表一条带的灰度值。使用直线工具,将每个峰连成封闭。首先,激活直线工具,然后在峰图窗口中利用直线将两个峰之间的谷底画一条线到底部,这样就形成了一个封闭的单峰了。(注意,直线一定要连接着峰的谷底,另外,在画线时候,我们可以按住shift,这样线就是垂直的了)。如下图所示。可以仔细对比图5和图4的差别。
图5:内参蛋白峰值封闭图
Step 6: 使用魔棒工具,点击每个峰内部,弹出面积结果窗口,并保存。
Step 7: 同样的操作目的蛋白的条带,并保存结果。
Step 8: 用目的蛋白Area/内参蛋白Area,得到比值。并作图。
需要获取imageJ 下载链接的微友,请在文末留言。
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