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细胞转染和血清,恩怨情仇你可了解?

ExCell Bio 医麦客 2021-05-31

科研小白的升级路上,会有很多道坎,在生物学领域我们经常和细胞打交道,“娇生惯养”的细胞偶尔也会有“脾气”,这期来讲讲“转染-Transfection”。

转染是指将DNA或者RNA导入细胞的技术。根据转染后核酸是否整合到宿主细胞染色体中分成“瞬转”(瞬时转染)和“稳转”(稳定转染)。


另一方面,根据转染中递送核酸的方法和介质的不同,转染方法分成三个大类,每一类又有多种具体的方法。


目前使用最广泛的是脂质体介导的化学法,它可以转染大多数细胞,转染效率高,重复性好

原理:阳离子脂质体表面带正电荷,可与核酸的磷酸根阴离子通过静电相与作用结合,将核酸分子(DNA, RNA)包裹入内形成复合物。复合物被表面带负电的细胞膜吸附,通过融合或内吞形成内体,最后释放核酸到胞浆内启动转录和表达。

本来这是一个很简单美好的脂质体和核酸相恋(结合),共赴新居(细胞)里走向幸福结局(蛋白表达/GFP之光被点亮)的故事,但如果你在这个过程中忽略了细胞的情人——血清的存在,那结果可能是Nothing...(好吧,这出爱情剧有够狗血)


转染过程需要优化DNA与转染试剂的比例,细胞密度,孵育、培养和检测时间等,同时需注意【血清】在这个故事里有两方面作用:


01

正面恩情

转染试剂处理后,由于有饥饿、细胞膜重构损伤等原因,细胞比较脆弱,需要再更换含脂质体试剂的培养基后,获得更多的呵护,而血清作为细胞的“情人”,可提供多种必需的营养物质。


02

负面仇怨

血清中富含各类蛋白,也带有大量负电荷,会和阳离子脂质体结合,和核酸相竞争,导致转染失败(血清这个细胞“情人”能耐不小,用错了就不好了)。因此在转染过程中需注意:
● 阳离子脂质体转染试剂和核酸分别用不含血清的基础培养基稀释混匀后,共同孵育10-20min,整个过程中不能有血清;

● 混合物转染细胞时,加不加血清要根据经验或预实验,不同的细胞,脂质体转染过程中血清的影响是不同的,可以查找下相关文献进行选择。


Doi:10.1023/a:100755310668

本文中,不同浓度血清对于COS-1, CV-1细胞用两种转染试剂转染时,影响各不相同,使用lipo2000时, COS-1 细胞对血清非常敏感,而CV-1会好很多;而有些转染试剂,血清不会对其转染效果造成影响。


相信通过上面的介绍,大家对于血清和细胞转染的恩怨情仇就有了全面的了解,做转染的成功率也会大大提升哟,奥力给!

转染实验中,血清和转染试剂非常重要,面对市场上琳琅满目的产品,小编给您几条建议:



血清挑选Tips


1、生物安全 近来,国外进口冷链运输产品频频被检测出新冠病毒,冷链生物安全成为全民关注热点,进口胎牛血清作为细胞培养的关键原料,需要全程冷链运输,又是动物源类产品,具有携带多种病毒的风险,其正规合法、安全性显得尤为重要,小编提醒大家,选择胎牛血清,一定要选择具有品牌知名度、能够稳定供应,且血源可追溯(资质)的供应商,共同保障国家生物安全。
2、南美血清  中华人民共和国允许进口的牛血源地只有澳大利亚、新西兰和乌拉圭。
合法正规途径进口的血清必须在产品包装上标注血源地,未标注或者模糊信息,只写南美或S.America,则可能是走私血清。




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依科赛(ExCell)胎牛血清


目前转染实验中一般用进口胎牛血清,依科赛生物(ExCell Bio)二十年来始终执着于品质和创新,是国内最大的胎牛血清和细胞培养产品供应商之一。始终坚持“正宗血源,正规进口”,可提供多种等级和血源地(乌拉圭、澳大利亚、新西兰、中国)的血清,同时提供免费试用和血清预留服务,给细胞最佳营养,为实验保驾护航。





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依科赛(ExCell)细胞转染试剂系列

纳米技术转染:高效低毒
时间短:15min完成转染
应用范围广:适用于大部分细胞,DNA和siRNA都可用
无需更换培养基:可在含有抗生素和血清的培养基中转染
转染效率高:转染效率高于脂质体转染



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