最新：FDA与基因治疗企业热议的AAV安全性盲点问题丨医麦新观察
2021年9月7日/医麦客新闻 eMedClub News/--腺相关病毒（AAV）是目前发现的一类结构简单的单链DNA缺陷型病毒，具有非致病性、安全性高、宿主细胞范围广和在体内表达时间长等特点。然而，虽然被认为是安全的病毒载体，但这些年，FDA对这一新兴疗法的安全性格外重视。
在近期（9月2日-3日）的“FDA细胞、组织和基因治疗咨询（CTGTAC）委员会会议”上，FDA与诸多基因治疗专家和公司，就AAV基因治疗的安全性开展了深入讨论。
▲ 图片来源：biopharmadive
FDA提出了一个众所周知、但很少讨论的基因疗法潜在安全问题——AAV的空衣壳，这也是会议第一天8小时会议期间监管机构提出的唯一后续（followup）问题。
FDA官员Andrew Byrnes解释说，监管机构不得不努力解决空衣壳杂质的问题，许多公司对此不够重视，因为这些工艺昂贵或耗时。“我们经常面临这个问题，但我们经常遇到阻碍。”
空衣壳是基因治疗制造过程的产物。AAV载体制造过程复杂，当前采用最多的就是经典的三质粒共转染法（Helper-free AAV包装系统），涉及将如下三个质粒共转染到HEK293细胞中，然后从细胞裂解物和培养基中分离纯化rAAV。
1. AAV-GOI：含有目的基因（GOI）的含AAV反向末端重复序列（ITR）的质粒；
2. AAV-RC：带有AAV复制（rep）和衣壳（cap）基因的AAV血清型质粒；
3. pHelper：AAV辅助质粒，提供从腺病毒中分离的辅助基因。
▲ AAV质粒系统
（图片来源：Addgene）
但有时，AAV不能正确地自行组装。仅仅形成了外壳，里面没有或仅含部分所需的基因组片段，这也就形成了空衣壳的情况。
科学家们很早就发现所有制造的AAV样本都含有一定水平的空衣壳，但一直不清楚空衣壳是否会带来危害，一些研究甚至表明它们可能是有益的。
然而，AAV的剂量越高，引起严重反应的风险更大。FDA和外部专家都担心，这些空衣壳会不必要地让患者接触到更多的外来蛋白质，增加免疫原性，从而引起基因治疗的安全性问题。
“空衣壳的毒性我们尚不确定，”Andrew Byrnes说，“但与此同时，就毒性而言，我们遇到了最大耐受剂量的限制，我们也正在寻找提高安全性的机会。”
鲜有企业会向公众披露其产品制造中的空壳率，在这方面产品与产品之间可能会有很大差异，比如一种基因疗法的空衣壳可能是1%，而另一种是50%，这意味着患者可能会被注入数万亿个不必要的外来蛋白质。
虽然到目前为止，还没有确凿的证据表明AAV临床试验中的任何安全问题由空衣壳导致。但在曾遭遇临床暂停、又重新启动的AAV基因治疗中，一些公司在恢复研究之前采取了减少空衣壳数量的措施，例如Solid Bio公司杜氏肌营养不良症（DMD）疗法。
另外，去年，Audentes公司（现被日本药企Astellas收购）的AAV基因治疗在临床研究中出现安全性问题。据报道，该疗法的剂量是有史以来注入人体的最高剂量之一，但Astellas拒绝透露其产品中含有多少空衣壳。
尽管最近AAV临床试验波折众多，但这不会阻碍AAV基因疗法的发展。机遇和挑战并存，AAV安全性的解决策略并不遥远。
策略1：优化AAV外壳
为减少AAV安全隐患，首先可以通过优化筛选AAV外壳，找到靶向性好、感染性强、免疫原性低的外壳。另外，还可以对AAV基础元件进行优化改造，解决随机插入等问题。
▲ AAV衣壳优化策略
（图片来源：Nature Reviews Drug Discovery）
策略2：优化AAV工艺
AAV在生产工艺上，对载体生产的纯度有很高要求。空衣壳不仅增加了AAV基因治疗的所需剂量，还会导致不必要的副作用，并引起针对病毒的不必要的免疫反应。因此，十分重要的一点是，采用经过验证的方法，高效地进行分离纯化以及空壳率检测，并最大限度地加以去除，同时明确含量的测定。
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活动日程
13:25-13:30
开场致辞
13:30-14:00
AAV基因治疗药物前沿进展
张瑜 辉大基因BD副总裁
14:00-14:30
AAV载体的工艺开发
孔令洁 博腾生物首席技术官
14:30-14:50
AAV载体的分离纯化及空壳率检测
叶苗 贝克曼库尔特生命科学离心机产品经理
14:50-15:10
毛细管电泳对AAV载体的表征
徐玲丽 丹纳赫生命科学应用科学家
15:10-16:10
丹纳赫中国生命科学研究院应用研发中心 实验室参观与案例分析
丹纳赫生命科学应用专家
现场参会福利
面对面互动体验AAV载体分析设备与方法
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现场活动将于“上海虹桥IBP国际会议中心”进行，日程结束后将参观带您参观丹纳赫中国生命科学研究院应用研发中心实验室，与您面对面互动体验AAV载体分析设备与方法。
活动地点：上海虹桥IBP国际会议中心 二楼 贰号会议室（上海市长宁区通协路258号）
现场体验 报名入口
如果您无法亲临现场，可以通过“线上入口”报名直播课程并参与嘉宾互动，实验室参观也会在线上同步进行。
线上直播 报名入口
参考资料：
1.https://www.fda.gov/advisory-committees/advisory-committee-calendar/cellular-tissue-and-gene-therapies-advisory-committee-september-2-3-2021-meeting-announcement#event-materials
2.https://endpts.com/the-long-overlooked-safety-issue-weighing-on-the-fdas-mind-on-day-1-of-marathon-gene-therapy-meeting/
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