2021溶瘤病毒药物开发论坛丨近岸蛋白质诚邀您来

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2021年9月18日/医麦客新闻 eMedClub News/--随着越来越多的生物制品（重组蛋白、Vero细胞疫苗等）进入治疗领域，生物制品的质量控制也日趋严格，其中核酸残留是各类质控标准的重中之重，因为DNA较好的稳定性，容易在生产过程中形成残留，而这些生物制品应用到人类疾病预防和治疗时，会带来不可控危险因素。终产品的宿主核酸残留量必须遵循WHO、FDA和EMEA以及我国NMPA监管条例。尤其近年来包括大牌进口产品在内的狂犬疫苗DNA残留超标问题，引起了社会和业界的广泛关注。

生物制品核酸残留的风险

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生产生物制品的宿主细胞多是连续传代细胞(CCLs)，因其调控生长的基因失灵，而拥有无限增殖的能力。CCLs的残留DNA可能使人体细胞增殖失控，变成肿瘤细胞。

此外，残留DNA中可能存在感染性病毒基因组，病毒基因组能够扩增并产生感染性病毒粒子。体外实验表明，1pg逆转录病毒的前病毒DNA就具有感染性。有些残留DNA可能携带HIV病毒或者Ras致癌基因，DNA感染性风险可能比致瘤风险更高。

另外，有学者认为，接种几十针疫苗后，其残留的DNA累积可能具有其他潜在危害：未发生降解的外源DNA，在哺乳细胞基因LINE-1的逆转录转座子作用下有插入细胞基因组的可能性，带来其他潜在风险。

而且，由于微生物来源的基因组DNA富含CpG和非甲基化序列，增加了重组蛋白药物在体内的免疫原性风险，可能增加体内免疫反应，诱导产生DNA抗体。

所以需要严格控制生物制品的残留DNA，避免上述种种风险危害。

WHO和各国药物监管机构一般将疫苗等生物制品的残留DNA控制在100pg/剂量，特殊情况下最高允许10ng/剂量。我国参照WHO、FDA和欧盟标准，在药典中对生物制品的核酸残留量有明确规定。药典中明确规定酵母、大肠杆菌表达的生物制品中DNA残留量不超过10ng/剂量。我国2020年药典将人用狂犬病疫苗（Vero细胞）DNA残留标准更新为≤3ng/剂。

我国部分疫苗及治疗用生物制品残余DNA标准

生物制品的核酸残留去除主要集中在病毒疫苗生产、重组蛋白药物纯化、细胞治疗和疫苗研究中缓解PBMC细胞结团以及慢病毒的大规模纯化等。

在一般的情况下，含氯消毒液、紫外灯照射等能够消除环境或产品表面的核酸，但是对于生物制品在生产过程中产生的核酸，则需要更具针对性的核酸去除剂，现在大多选择核酸酶进行去除。核酸酶能够消除核酸残留的潜在危害，降低样品粘度，提高产品纯化效率。

近岸蛋白质提供GMP条件下生产的BenzoNuclease，无动物源性, 无氨苄青霉素，可高效降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的DNA及RNA。质量、性能、供货能力可靠，并已完成在FDA的药物主文件（Drug Master File, DMF）申报备案，满足药物申报的规范。

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什么是全能核酸酶？

BenzoNuclease是一种来自于粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens），经基因工程改造的核酸内切酶。BenzoNuclease可降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的DNA及RNA，将核酸完全降解成3~5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸。因其能高效降解任何形式的 DNA 和 RNA，又被称为“全能核酸酶”。

无论在实验室研究还是在工业级生产的过程中，BenzoNuclease是去除生物制品中所有形式DNA和RNA的一种有效工具酶。通过高效的核酸去除，可显著提升后续实验、生产的效果及产量，性能优于其他核酸去除方法。

BenzoNuclease可解决如下问题

• 去除疫苗类产品外源性核酸，降低核酸残留毒性风险，提高产品安全性

• 降低细胞/细菌裂解时核酸释放产生的黏度，缩短处理时间，提高病毒/蛋白产量

• 去除缠绕在颗粒（病毒、包涵体等）表面的核酸，利于颗粒的释放和纯化

• ELISA、柱层析、二维电泳和印迹分析的样品制备，经核酸酶处理后可提高分辨率和回收率

• 用于预防细胞的结团

• ……

严格的质量控制及生产标准

宽泛的反应条件

优异的性能

1、保存稳定性以及冻融稳定性

2、消化不同类型核酸

3、钠离子、钾离子的影响

4、Triton^® X-100的影响

更多产品性能数据请联系近岸小伙伴或拨打联系电话[phone]获取！

Q&A  

1. 在哪一步中加入 BenzoNuclease？

BenzoNuclease可直接加入至细胞/细菌裂解液中进行作用。注意，若裂解液中不含Mg²⁺，需补加Mg²⁺至1-2mM。

2. 当反应温度低于 37℃时，如何保证 BenzoNuclease 的消化效果？

在体系固定的情况下，BenzoNuclease 的消化效果主要取决于酶用量、反应温度以及反应时间，当反应温度较低时，为避免过多的 BenzoNuclease 引起的残留问题，更加推荐延长反应时间来保证 BenzoNuclease 的消化效果。

3. BenzoNuclease 的抑制条件有哪些？

BenzoNuclease 可在较为宽泛的条件下保持活性，但 1-2mM Mg²⁺对其活性至关重要。

一般情况下，BenzoNuclease 的活性可被高盐抑制，例如：> 500 mM 的一价阳离子（如 Na⁺、K⁺等）、>100 mM 的盐酸胍（guanidine HCl）、> 100 mM 的磷酸盐（phosphate）、> 100 mM 的硫酸铵（ammonium sulfate）等。此外，螯合剂也可通过螯合体系中的Mg²⁺以达到抑制酶活的作用，通过加入更多的 Mg²⁺可恢复 BenzoNuclease 的活性（1mM 的 EDTA 可部分抑制 BenzoNuclease 活性，5mM 的 EDTA 可使其活性丧失约 90%。

4. BenzoNuclease 与蛋白酶抑制剂可以兼容吗？

可以。但需要注意，最好选择不含 EDTA 的蛋白酶抑制剂（≥1mM 的 EDTA 可抑制 BenzoNucleased 的活性）。

5. 如何去除 BenzoNuclease？

BenzoNuclease 融合了 6×His 标签，可通过镍柱将其去除。此外，也可结合所生产产品本身的纯化工艺对BenzoNuclease进行去除，如通过 TFF（tangential flow filtration）、透析及色谱（IEX, SEC, HIC）、超滤等。

6. BenzoNuclease的应用是否有专利限制？

无专利限制。

7. 料液经过BenzoNuclease处理后的核酸残留使用什么方法检测比较好？

推荐使用qPCR进行检测，qPCR方法的灵敏度和重复性较好，并且可定量，可以对核酸残留有更加准确的把握。

订购信息

耐高盐全能核酸酶即将推出，如有需要可联系近岸小伙伴申请使用哦！

——2021溶瘤病毒药物开发论坛——

2021年9月23-24日

近岸蛋白质邀您参加医麦客2021溶瘤病毒药物开发论坛，我们在T2展位等您，期待与您的交流！

时间：2021年9月23-24日

地点：上海长荣桂冠酒店宴会厅

因为专注，所以专业

近岸蛋白质致力于为生物行业提供优质产品及解决方案

近岸蛋白质是一家专业从事mRNA疫苗原料、靶点蛋白、细胞因子、分子试剂和诊断原料的研发生产及抗体药CRO服务的高新技术企业。公司产品及服务涵盖mRNA疫苗、抗体药、细胞治疗、IVD、NGS、基因编辑等多个领域；并提供差异化抗原开发-噬菌体建库-高通量候选分子筛选-人源化与亲和力成熟-快速重组表达与表征等一站式抗体药物开发服务。

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或致电400-600-0940

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展位号：T2

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