SOP文件 | 酸性磷酸酶染色(ACP)洒石酸法操作规程及临床意义

目的：提高血细胞认知的准确率，有助于某些血液病的诊断。

原理：

细胞中的ACP能使底物萘酚AS-BI磷酸水解，释放出不溶性萘酚，后者与偶氮染料坚固石榴红结合，形成有色的物质。L（+）酒石酸能掏酸性磷酸酶同功酶1-4活性，而不能抑制同功酶5。

试剂：

1、固定液：先将丙酮60ml与0.03mol/L枸橼酸溶液40ml混匀，取其中90ml与甲醇10ml混合，用1mol/LNAOH调至PH5.4，在4-10℃下保存，用前轻轻摇匀，该溶液可稳定1个月。

2、底物贮存液：100mg萘酚AS-BI磷酸溶解于N，N-二甲基酰胺10ml中，该贮存液保存在2-10℃可稳定2个月。

3、底物染色液1号（不含酒石酸）：取0.1mol/L醋酸盐缓冲液（PH5.2）50ml与底物贮存液1ml及坚固石榴红GBC25mg混匀，用滤纸过滤；

4、酒石酸溶液：称取L（+）酒石酸3.75g，溶解于0.1mol/L醋酸盐缓冲液（PH5.2）490ml中，用NaOH溶液调节至PH5.2，用蒸馏水加至总量500ml，置4～10℃保存。

5、底物染色液2号（内含酒石酸）：取酒石酸溶液50ml，与底物贮存液1ml及坚固石榴红GBC25mg混合，用滤纸过滤。

操作步骤：

1、置二张新鲜制备的血涂片（或骨髓片）于固定液中固定30s（4～10℃）。

2、用蒸馏水冲洗片子3次，置室温10～30min使干燥。

3、将1张已固定涂片置底物染色液1号中；另1张已固定涂片置底物染色液2号（内含酒石酸）中，37℃下温育45min。

4、用流水冲洗。

5、用Mayer苏木素复染液复染1～3min。用流水冲洗，空气干燥后置显微镜下检查。

结果判断：

凡有紫红色颗粒者为阳性。

附注：

ACP染色也有用Gomori硫化铅法，但因其操作复杂而且结果不稳定，现已被本法所取代。

临床意义：

1、在ACP染色中，原粒细胞为阴性，早幼粒、中幼粒及晚幼粒细胞为中度阳性，成熟中性粒细胞为弱阳性。幼稚及成熟单核细胞为弱至强阳性（血象中单核细胞大多为弱阳性）。淋巴细胞为极弱阳性。浆细胞及巨核细胞呈中度阳性。血小板为弱阳性。幼红及成熟红细胞则为阴性。

2、协助诊断毛细胞白血病：毛细胞常表现为中度阳性至强阳性，而且具有抗L（+）酒石酸掏的特性（RPAP）。但并非所有毛细胞白血病细胞都是TRAP阳性。

3、区别淋巴细胞的类型：T淋巴细胞经ACP染色常为阳性，因此在约86%的急性T淋巴细胞白血病患者中有90%～99%白血病细胞为阳性。而在10%的急性非T、非B淋巴细胞白血病细胞中仅0～23%为阳性。

4、用于鉴别细胞：鉴别浆细胞、骨髓瘤细胞（阳性或强阳性）与淋巴细胞（阴性或弱阳性）；传染性单核细胞增多症中异常淋巴细胞（阳性）与正常淋巴细胞（阴性或弱阳性）；高雪细胞（Gaucher）（强阳性）与尼曼－匹克（Niemann-Pick）细胞（阴性）。

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