新冠病毒核酸检测中，不合格样本如何判定？

根据国家指南，目前新型冠状病毒的实验室检测采用实时荧光 RT-PCR 方法检测新型冠状病毒核酸，属于分子诊断学方法。

根据《临床分子诊断学》，分子诊断标本的不合格常见于采集操作不规范引起的外源核酸污染、模板 RNA 降解以及 PCR 抑制物的存在：

1、外源核酸污染 ：由于 PCR 的灵敏度非常高，理论上一个核酸分子的污染都有可能引起结果的假阳性，因此 PCR 标本采集最好使用无菌、无核酶的一次性器材，取材必须严格执行无菌操作，并小心防止混入操作者或受检者的毛发、皮屑等。密封运输和保存，不能在扩增区域进行标本的采集和处理，防止 PCR 产物的污染。

2、靶基因的降解 ：情况下，无菌采集的 DNA 样本稳定性较好，在室温下放置 8h 仍不影响检验，但如果操作不当、抽血容器不清洁、放置时间过长或有污染，DNA 链有可能发生断裂，使长片段的扩增变得困难。靶基因降解对于 RNA 样品影响更为严重，由于环境中大量 RNA 酶的存在，若样品保存、运输条件不佳或存放时间过长，模板 RNA 非常容易降解，造成假阴性。

3、PCR 抑制物：反转录反应和 PCR 反应均为酶促反应，任何可能抑制这些反应的物质都会影响检验的结果。

在新冠病毒核酸检测中，不合格样本通常是由于采样问题和采样用具问题导致的。

PCR 检测体系含有阳性内对照（内标），该内对照使用的是内源性对照，通过检测内标是否正常来监测待测样本采样、提取过程以及样本中是否有核酸抑制物，避免 PCR 假阴性。当采样时若标本没有采集到位或采集量极少，在进行分子检测中就没有内标，无法报告定性结果。

「有时候采集的咽拭子或鼻拭子中粘液成分过多，也会对 RT-PCR 结果造成影响，会报为不合格样本重新采样。」

在临床中另一个比较常见的情况就是送检样本盖子没盖严或有泄漏。这种情况下既会存在生物安全风险，同时发生泄漏后标本可能会受到污染或含量变少不够检测，在这种情况下也会报告不合格样本。

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