SOP文件 | 红细胞RBC手工法计数操作规程及临床意义

实验原理：

用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经过换算求得每升血液中的红细胞数量。

标本采集及处理: 

EDTA抗凝血或手指血。

1、采血步骤

（1）登记：登记的内容包括病人的姓名，病历号，采血时间，登记编号，医生姓名，送检部门等。

（2）识别病人：问清病人并识别病人是至关重要的。

（3）病人的体位：坐位采血；卧位采血；采血时病人的口中不准含食物、口香糖等，以防意外。

（4）选择适当的静脉，最宜采血的肘窝静脉，也可在腕，手，踝静脉采血。

2、注意事项:

（1）病人宜处于休息状态，并且在早餐前采血（乳糜血影响检测结果）。

（2）针头不应小于21GAVGE。国际推荐用21G1.5或20G1.5号针头，确保针头与空针联接牢固，以免产生泡沬。

（3）抽血时要“一针见血”，如抽血过慢或不太顺利，将会影响检测结果。

（4）取样完毕，立即与抗凝剂充分混合，混合抗凝标本时需轻微的但彻底的混匀，一般轻轻的翻转5至10次，要避免用力振摇，以免标本溶血影响结果。

3、抗凝剂的选择：EDTA抗凝

4、 标本的送检

（1）标本采取前先将标本编号贴在采血管上，采血后应进行核对。

（2）标本应带盖存放；存贮时间为2－8℃＜4小时；因此取血后应及时送至实验室，以免检测结果受到影响。

5、标本处理

(1) 检验人员收到标本后应首先逐个检查其是否符合检验要求。如果不符合检验要求的标本需通知临床重新采血。

(2) 包括抽血量不标准（过多或过少）、目测发现采血管中存在小血丝或小血块，如果排除病人体内自身溶血的情况，人为造成的溶血标本以及重度乳糜血的标本等。

(3)核对化验单申请检验项目，编号登记。

操作步骤:

1.准备材料：计数板、标本血液、红细胞稀释液、微量吸管、盖玻片、显微镜等。

2.取试管1支，添加稀释液2.0ml。

3.利用校准的微量吸管吸取末梢血10µl。

4.擦去吸管外部余血，将10µl全血吹入稀释液，并用稀释液洗尽吸管内余血，2～3次立即混匀。

5.将计数板及盖玻片擦净，将盖玻片覆盖于计数板上。

6.用滴管吸取混匀的红细胞悬液充入计数室。

7.静置2～3min后，用高倍镜计数血中方格内四角和正中的5个中方格的数。边线上的细胞按“数上不数下，数左不数右”的原则计数。正常血液每个中方格的计数误差不大于10。

8.计算：红细胞/升=5个中方格内红细胞计数N/100×10¹²/L。

在操作过程中需要避免吸量误差;以及充池时避免空泡，若出现空泡则需要重新充池;稀释液含有氯化高汞有剧毒，操作时注意自我防护。

临床意义：

1、增多 

（1）相对性增高：因脱水等因素，使得血液相对浓缩所致。常见于剧烈呕吐、严重腹泻、大面积烧伤、大量出汗、多尿和水的摄入量显著不足的患者。

（2）绝对性增高：与组织缺氧有关。可引起继发性红细胞增多，如慢性肺源性心脏病、发绀性先天性心脏病、慢性一氧化碳中毒、登山病等。

（3）真性红细胞增多症：是一种以红细胞数量明显增多、脸面呈砖红色、肝脾肿大为特征的疾病，红细胞数量通常可达（7-12×10¹²/L）。

2、生理性减少：

妊娠期因血浆量在血液中相对增多，故红细胞数相对减少。3个月的婴儿至15岁的儿童，因生长发育迅速而致使造血原料供应相对不足，红细胞和血红蛋白可较正常人低10%-20%。老年人由于骨髓造血功能逐渐减低，均可导致红细胞和血红蛋白含量减少。这些属于生理性减少。此时，患者需要进行适当的营养与治疗，并不意味着患者有贫血性疾病或疾病导致的贫血。

3、病理性减少：

（1）红细胞减少所致的贫血：一是由于骨髓造血功能衰竭，如再生障碍性贫血、骨髓纤维化等伴发的贫血；二是由于造血物质缺乏或利用障碍引起的贫血，如缺铁性贫血、铁粒幼细胞性贫血、叶酸及维生素B₁₂ 缺乏所致的巨幼细胞性贫血。

（2）因红细胞膜、酶遗传性缺陷或外来因素造成红细胞破坏过多导致的贫血：如遗传性球形红细胞增多症、地中海性贫血、阵发性睡眠性血红蛋白尿、异常血红蛋白病、免疫性溶血贫血、心脏体外循环的大手术及一些化学、生物因素等引起的溶血性贫血。

（3）各种失血：外伤或手术造成的急性失血，消化道溃疡、钩虫病等原因引起的慢性失血均可导致红细胞减少。

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