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＂微生物的实验室培养＂考点突破
【知识网络】【预热小练】
1. 液体培养基含有水，而固体培养基不含水。（ ）
2. 纯化大肠杄菌可选用牛肉膏蛋白胨培养基。（ ）
3. 培养基分装到培养皿后进行灭菌。（ ）
4. 平板冷凝后应将平板倒置，可以避免水分过度蒸发，也可防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染。（ ）
5. 转换划线角度后需要灼烧接种环再进行划线。（ ）
【答案与分析】
1. × 分析：液体培养基与固体培养基都含有水，它们的区别为是否添加凝固剂。
2. √
3. × 分析：培养基分装到培养皿前进行灭菌。
4. √
5. √ 分析：从前一区域划线的末端开始往后一区域内划线之前，需要灼烧接种环。
【真题集训】
【典例1】已知一种有机物X（仅含有C、H两种元素）不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌（目标菌）。
Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X（5 g/L）。
Ⅱ号培养基：氯化钠（5 g/L），硝酸铵（3 g/L），其他无机盐（适量），X（15 g/L）。
Ⅲ号培养基：氯化钠（5 g/L），硝酸铵（3 g/L），其他无机盐（适量）。X（45 g/L）。
回答下列问题。
（1）在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是______。
（2）Ⅱ、Ⅲ号培养基中为微生物提供碳源的有机物是______。
【答案与分析】
答案：（1）牛肉膏、蛋白胨 （2）x
分析：（1）氮源是微生物生长需要的一类营养物质，是含氮化合物，可为微生物的生长提供氮元素，牛肉膏、蛋白胨来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质，因此在1号培养基中，可为微生物提供氮源的是牛肉膏、蛋白胨。
（2）碳源也是微生物生长所需要的一类营养物质，可为微生物的生长提供碳元素，而有机物均含碳元素，II、III号培养基均含有有机物X，因此，II、III号培养基为微生物的生长提供碳源的均为有机物X。
【点拨】
（1）因微生物新陈代谢类型的不同，培养基中碳源的类型有所差异，自养生物（硝化细菌等）需要无机碳源（CO2），异养生物需要有机碳源。
（2）因微生物固氮能力的不同，培养基中氮源的类型有所差异，固氮微生物（根瘤菌）需要氮气（N2）作氮源，非固氮微生物需要硝酸根离子、铵根离子、蛋白质、尿素等含氮物质作氮源。
【典例2】回答下列与细菌培养相关的问题。
（1）用平板培养细菌时一般需要将平板______（填“倒置”或“正置”）。
（2）单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是_____。
（3）有些使用后的培养基在丢弃前需要经过_____处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。
【答案与分析】
答案：（1）倒置 （2）在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征 （3）灭菌
解析：（1）用平板培养细菌时，一般需要将平板倒置培养，以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
（2）由于每一大类微生物都有其独特的细胞形态，因而其菌落形态特征也各异，因此根据菌落的形态、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物。
（3）有些使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。
【点拨】
（1）消毒或灭菌的原理：破坏了微生物细胞内的蛋白质和核酸，从而影响其生命活动。
（2）菌落概念：由一个细菌繁殖而来的子细胞群体；菌落特征：菌落性状、大小、隆起程度和颜色；成因：在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征。
（3）消毒和灭菌的对象：涉及芽孢和孢子杀灭，为灭菌；不涉及芽孢和孢子杀灭，为消毒。芽孢一般是细菌为度过不良环境条件时存在的繁殖体，孢子是真菌产生的繁殖体，如毛霉的直立菌丝顶端有孢子囊，可以产生和释放毛霉孢子。
（4）含碳酸氢钠等受热易分解营养物质的培养基不能用高压蒸汽灭菌法，而应该用过滤灭菌法。
（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的______，及时对培养基进行分装，并进行___________灭菌。
（2）挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有____。
a．为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
b．划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量
d．可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株
【答案与分析】
答案：（1）pH 高压蒸汽 （2）a、b、d
分析：（1）配制培养基的操作步骤为称量→溶化→定容→调pH→培养基的分装→包扎→灭菌，因此微生物的培养基配制好后应该先调节pH，再分装。常见的灭菌方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌。培养基适宜用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。
（2）在划线过程中，接种针、接种环使用前都必须灭菌，以防止杂菌污染，a正确；划线时应避免划破培养基表面，否则将不能形成正常菌落，b正确；该实验的目的是获得利用工业废甲醇作为碳源的酵母菌，不需要测定酵母菌中的甲醇含量，c错误；培养基中的甲醇浓度越高，此种培养基中得以生存的酵母菌利用甲醇的能力越强，因此可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株，d正确。
点拨：
（1）为了满足目的微生物生长繁殖的最适环境条件，培养基需要定容调pH，在溶化后分装前进行。
（2）一般而言，实验筛选、纯化和鉴别在平板固体培养基上进行；工业发酵用液体培养基；半固体培养基可用于观察微生物细胞活动。