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干货 | 代谢组样本采集方法集萃（一）
样本的收集是代谢组学研究的关键一环，为了保证实验结果的准确可靠，需要严格执行相应的样本采集原则和标准。今天小编就给大家介绍一下不同类型样本的采集方法与注意事项。
代谢组样本采集原则
1、一致：所有组别样本需要在取材部位、取材时间、取材过程、取材器具需要完全相同。2、低温：因为代谢物在常温条件呈动态变化，为了最大限度反映样本最原始的代谢谱及浓度，建议样本离体采样过程需要在冰上操作，同时需要将离体样本立即液氮速冻，尽快放于-80℃保存，同时运输过程需要足量干冰运输，并保证运输过程中干冰不能完全挥发掉。3、备份：因为同一个体样本可能同时用于多个组学研究，因此建议采样时将同一个体样本分装多份进行备份，这样不仅防止样本不够，还避免了因解冻分装造成的反复冻融对代谢组检测准确度的影响。4、洁净：为防止对仪器的损害以及保证实验结果的准确可靠，需要保证所有取材器具的洁净度（例如无去垢剂、强酸强碱等污染），建议使用进口离心管，避免塑化剂污染。血浆样本
采集步骤1、使用肝素钠抗凝管采集全血（2-4 mL），采血后，轻轻颠倒8-10次（动作要轻柔，免避红细胞破裂，产生溶血），使抗凝剂与血液均匀混合。2、4℃或冰上静置10min，先低速离心（3000rpm，10min，4℃），取上层血浆，再高速离心（12000rpm，10min，4℃）。3、离心完取上层血浆，移至1.5mL离心管（建议用进口离心管，避免塑化剂污染），200μL等量分装，做好标记，封口膜密封，液氮速冻15min，尽快在-80℃冻存。4、需干冰运输，干冰建议用量 5kg/天，根据预计运输需要时间计算，夏天干冰挥发快，需多放置干冰。注意事项1、LC-MS推荐使用肝素钠管（绿头管）和EDTA抗凝管(紫头管），NMR 平台推荐使用肝素钠管（绿头管），请勿使用柠檬酸钠抗凝管（因为柠檬酸是TCA 循环中的物质，使用柠檬酸钠抗凝管会引入外源污染）、PAXgene 管和添加促凝剂管。2、检测样本是否有溶血，如果发现样本中是红色，说明样本出现了溶血，需要重新采样。3、如果是室温放置，30min之内尽快离心分离血浆，若不能尽快离心，采集的血液需放在4°C冰箱或者冰上保存，并必须在1h内完成离心，避免出现溶血现象。4、取血时如用酒精消毒，需等酒精完全挥发后再采样。5、同一个体血清和血浆中所包含的代谢物种类类似，但是某些代谢物含量则有所差异：血浆中柠檬酸、尿酸、丙酮酸更高。血清样本
采集步骤1、使用无任何添加剂（不能含有任何抗凝剂或促凝剂）的管子采集全血（2-4 mL）。2、4℃或冰上（不建议室温放置）静置（注意不能震摇采血管）约1h，待血液凝固后，先低速离心（3000rpm，10min，4℃），取上层血清，再高速离心（12000rpm，10min，4℃）。3、离心完取上层血清，移至1.5mL离心管（建议用进口离心管，避免塑化剂污染），200μL等量分装，做好标记，封口膜密封，液氮速冻15min，尽快在-80℃冻存。4、需干冰运输，干冰建议用量 5kg/天，根据预计运输需要时间计算，夏天干冰挥发快，需多放置干冰。注意事项1、血清样品采样必须使用无任何添加剂（不能含有任何抗凝剂或促凝剂）的采血管（红头管）。2、检测样本是否有溶血，如果发现样本中是红色，说明样本出现了溶血，需要重新采样。3、取血时如用酒精消毒，需等酒精完全挥发后再采样。4、同一个体血清和血浆中所包含的代谢物种类类似，但是某些代谢物则有所差异：血清中氨基酸、葡萄糖更高。粪便样本
采集步骤1、人体粪便样本：将粪便排泄到架在马桶上的一次性粪便收集盒中（采样前先排尿，尽量避免尿液对样本的污染），然后用无菌勺或无菌牙签取新鲜粪便中段内部（不要取粪便表面，表面有肠粘膜脱落细胞），迅速分装样本250mg/管（建议用进口离心管，避免塑化剂污染），每个样本取多管备份，做好标记，封口膜密封，液氮速冻15min，尽快在-80℃冻存。2、鼠粪便样本：将个体小鼠/大鼠放进干净的铺有无菌滤纸的笼子里（不同鼠取样时需垫铺新的无菌滤纸），等待鼠自然排便（除了自然排便也可以采用应激排便：固定住小鼠，提起尾巴，轻轻按压小鼠腹部直肠末端让其排便），排便后立即用无菌镊子粪便采集到无菌离心管中（小鼠需要采集大于3-6粒粪便样本，大鼠需要采集2-3粒粪便样本），保证每管250mg。做好标记，封口膜密封，液氮速冻15min，尽快在-80℃冻存。3、需干冰运输，干冰建议用量 5kg/天，根据预计运输需要时间计算，夏天干冰挥发快，需多放置干冰。注意事项1、由于粪便中的微生物非常丰富，而且代谢速度较快，为了检测样本粪便原始的代谢谱和浓度，取样后需要尽快放在-80度冰箱保存（如果取样地点距离-80度冰箱较远，需要将样本管放在冰上，干冰上或液氮中运送到实验室保存）。唾液样本
采集步骤
1、收集新鲜样本至1.5mL或2mL无菌离心管， 4°C离心（12000rpm）10min，取上清液移至1.5mL无菌离心管，250μL等量分装（非靶向代谢组要求250μL；靶向代谢组要求500μL；脂质组学要求1mL），做好标记，封口膜密封，液氮速冻15min，尽快在-80℃冻存。
2、需干冰运输，干冰建议用量 5kg/天，根据预计运输需要时间计算，夏天干冰挥发快，需多放置干冰。
注意事项
1、唾液取样建议清晨起床漱口前取样，采样前1小时内没有进食、饮水、抽烟或嚼口香糖。
尿液样本
采集步骤1、取晨起中段尿5mL置10mL离心管，低温离心（12000rpm，10min，4℃），吸取上层澄清尿液，500μL等量分装（非靶向代谢组要求500μL；靶向代谢组要求1mL；脂质组学要求2mL），做好标记，封口膜密封，液氮速冻15min，尽快在-80℃冻存。2、需干冰运输，干冰建议用量 5kg/天，根据预计运输需要时间计算，夏天干冰挥发快，需多放置干冰。注意事项1、动物则取晨间 1h 尿，若尿量不足，可分多次收集尿液，若采集24h尿液，请使用带有低温装置的代谢笼采集样本并及时冻存，并添加防腐剂叠氮化钠（0.05-0.1%w/v）（叠氮化有剧毒，请务必注意安全，请做好相应的防护措施）。组织样本
采集步骤1、根据实验目的取特定组织，然后立即用预冷的生理盐水或去离子水清洗组织上的血液残留，将每250mg组织样本分装入无菌管中，每个样本取多管备份，做好标记，封口膜密封，液氮速冻15min，尽快在-80℃冻存。2、需干冰运输，干冰建议用量 5kg/天，根据预计运输需要时间计算，夏天干冰挥发快，需多放置干冰。注意事项1、不同组别的生物学重复取样部位、组织块大小必须完全相同一致2、尽可能不要取不相关的周边组织样本。3、取样过程中避免使用麻醉剂，以及注意相关器械的洁净度。相关链接：
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