向“真”而生，只为更好！为了让客户获得更真实、更丰富的真菌多样性检测结果，天昊生物创新型技术--AccuITSTM真菌绝对定量测序，今天终于跟大家见面啦！这是继天昊生物推出Accu16STM细菌绝对定量测序服务两年多后，再一次迎来天昊微生物多样性检测技术的重磅升级！创新型技术微生物多样性检测长期以来存在两大问题：一个是常规微生物扩增子测序数据通过抽平后，只能获得微生物群落组成的相对比例，这种处理造成样本微生物数量信息的丢失，无法真实反应样本中实际菌群的绝对拷贝数。另一个是目前研究常用qPCR绝对定量和常规扩增子测序的联合策略来获得菌群绝对丰度和微生物群落结构，但是qPCR绝对定量技术对样品质量要求较高，尤其对PCR抑制剂敏感，而这又是土壤和肠道粪便等样本无法完全去除的，这也导致qPCR绝对定量的结果不够准确。面对上述两大问题，为了能够得到更加真实的检测结果，天昊生物在无市场同类技术服务情况下，持续人力物力投入，成功研发出微生物扩增子绝对定量测序的独创型技术服务。该方法通过向样品DNA中添加一定量人工合成内参标准品序列，进行扩增子文库构建及二代高通量测序，再根据内参标准品测序序列数及其绝对拷贝数绘制标准曲线，最终计算出样品中OTU代表序列对应微生物菌群的绝对拷贝数。在2019年，公司成功推出了Accu16STM细菌绝对定量产品，市场反响热烈。至今公司检测项目累计已经超过百项。根据2020年发布的影响因子统计，天昊客户同期使用Accu16STM细菌绝对定量技术，比使用常规16S扩增子相对定量发表的文章影响因子平均高1.8分，提高幅度达48%，这也从学术产出角度表明我们的Accu16STM细菌绝对定量技术得到了更高水平杂志的认可。

微生物16S扩增子绝对定量测序相关项目文章：1.天昊16S扩增子绝对定量测序项目新文：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子通过改善肠道失调和减轻炎症来保护小鼠免受肝细胞癌侵害；2.天昊16S扩增子绝对定量测序项目新文：金针菇β-型糖苷多糖对结肠炎小鼠的抗炎及肠道菌群调节作用；3.喜讯！天昊生物16S扩增子绝对定量测序项目文章再次登陆《Science

7500实时PCR系统进行实时PCR扩增。PCR引物序列在附表S1中列出。在96孔板中设置复孔，将表达数据标准化为内参GAPDH的表达，并根据△△CT方法计算。粪便样本肠道微生物分析使用QIAamp

天昊文章快讯南京农业大学食品科学技术学院赵立艳教授课题组的研究成果近期发表在SCI一区期刊《Food

近年来，随着研究的深入，与表型联系紧密的代谢组学得到越来越广泛的应用，目前发现很多代谢物与特定疾病密切相关，例如短链脂肪酸与肠道疾病、代谢类疾病以及神经系统疾病；TMAO与心血管疾病；胆汁酸与肝胆疾病以及精神疾病；神经递质与神经系统疾病以及肠道疾病；氨基酸与精神疾病以及免疫疾病密切相关，基于此背景，目前针对特定疾病肠道菌群的研究模式已经由单一的微生物组测序向肠道菌群-疾病相关特定代谢物-宿主的多层次研究模式转变，打个比方，如果想研究心血管疾病与肠道菌群的关系，从技术手段上来说可以采用扩增子测序或宏基因组测序（筛选组间差异微生物）+心血管疾病相关代谢物（TMAO）靶向代谢组（筛选组间差异TMAO）这样精准到位的联合方案，当然也可以采用扩增子测序或宏基因组测序（筛选组间差异微生物）+非靶向代谢组（广泛筛选组间差异代谢物）+靶向代谢组（验证组间差异代谢物）这样逐级验证的联合方案，但是不管怎样，非靶标代谢组因为只能对代谢物进行相对定量检测，所以只能作为初步筛选的工具，而靶向代谢组因其可做到绝对定量才是点睛之笔，因此其也是代谢组高分文章的必备工具，但是需要注意的是靶向代谢组可以做到精准定量，那么与之联合的微生物组测序也必须做到绝对定量才可以使最终得到的代谢物-菌群相关性分析结论是真实可靠的，如果代谢物是绝对定量分析，微生物是相对定量分析，就会因为微生物相对定量分析可能造成的假因果导致最终的相关性结论有可能存在错误，因此，我们强烈推荐基于物种绝对定量（天昊扩增子绝对定量测序）和代谢物绝对定量（靶向代谢组）进行相关性分析，下面我们就给大家展示一下我们推荐的理由。技术原理类似◆靶向代谢组：该方法是向样本中加入标准品，进行代谢组检测，再根据标准品浓度和峰面积绘制标准曲线，然后基于标准曲线将目标代谢物的峰面积转化为浓度，从而得到样本中代谢物的绝对浓度。◆扩增子绝对定量测序：该方法通过向样品中加入标准品，进行扩增子测序，再根据标准品序列的序列数及其16S

如何将微生物群落结构和微生物绝对定量有机结合起来从而同时获得微生物群落结构和微生物绝对丰度是目前微生物研究领域的一个技术趋势，同时对微生态的分析工作具有重大意义，今天小编就向大家介绍几种微生物绝对定量研究技术，看看哪个才是适合您的那个它。01Number1微生物总拷贝数qPCR定量+常规相对定量扩增子测序原理：◆首先利用细菌（16S）或真菌（ITS）的通用引物进行qPCR，获得样本总细菌或总真菌的总拷贝数；◆然后使用常规细菌16S相对定量扩增子测序或者常规真菌ITS相对定量扩增子测序获得每个物种相对丰度（百分比）；◆通过微生物总拷贝数和物种相对丰度的乘积来推断每个微生物的绝对丰度。优点：应用比较灵活，对已有常规扩增子测序结果的项目可以补加微生物总拷贝数qPCR检测，从而转化成绝对定量结果。局限性：◆微生物总拷贝数与各菌种相对丰度信息分别来源于qPCR和高通量测序两个独立检测方法，两种方法检测都存在一定误差，并且这种误差无法得到矫正，从而使获得的特定菌种拷贝数准确性受到影响。◆这种联合只适合高丰度物种（物种的相对丰度大于10%）的绝对丰度推断，当物种的相对丰度较低时，这种联合分析推断的绝对丰度估计值很容易出错，并且可能在从低细菌丰度增殖时期和后期收缩到低丰度的过程中可能会歪曲单个物种的动力学。◆qPCR进行微生物总拷贝数定量时，构建标准曲线的标准品不含有腐殖酸而环境样本则含有腐殖酸，并且两者在两个样本孔中分别进行各自的PCR反应，所以PCR反应效率不同，因此微生物总拷贝数qPCR定量结果会有偏差，从而对后续获得的特定菌种拷贝数准确性有影响。相关文献解读：相对丰度会歪曲实际丰度，联合16S扩增子测序和总菌qPCR获得的绝对丰度可靠吗？；Atmospheric

目前细菌群落研究常用的技术是16S相对定量扩增子测序，而最近越来越多的研究者开始采用绝对丰度（即菌群的实际数量）对细菌群落进行绝对定量研究，今天小编就微生物绝对定量研究的一些常见问题在此总结一下。问答1绝对定量相对于常规16S相对定量扩增子测序最大的优势是什么？常规16S扩增子测序方法能解析样本中的物种组成和其相对丰度信息，因此对微生态研究具有重要的促进作用。然而我们需要注意一点，那就是相对丰度并不能反映样本每种微生物的真实数量和组间样本的真实差异，这是为什么呢？这是因为相对丰度分析忽略了不同样本之间总体微生物量存在的现实差异，造成了分析结果的偏差，而绝对定量分析则是计量样本每种微生物的16S基因拷贝数或者数目，从而实现绝对定量，因此相对于常规16S相对定量扩增子测序，绝对定量分析能反映样本每种微生物的真实数量和组间样本的真实差异，因此绝对定量分析相对于相对定量分析更能反映样本细菌群落的真实变化，是进行微生态研究的首选。支持文献1：Quantitative

样本的收集是代谢组学研究的关键一环，为了保证实验结果的准确可靠，需要严格执行相应的样本采集原则和标准。今天小编就给大家介绍一下不同类型样本的采集方法与注意事项。代谢组样本采集原则1、一致：所有组别样本需要在取材部位、取材时间、取材过程、取材器具需要完全相同。2、低温：因为代谢物在常温条件呈动态变化，为了最大限度反映样本最原始的代谢谱及浓度，建议样本离体采样过程需要在冰上操作，同时需要将离体样本立即液氮速冻，尽快放于-80℃保存，同时运输过程需要足量干冰运输，并保证运输过程中干冰不能完全挥发掉。3、备份：因为同一个体样本可能同时用于多个组学研究，因此建议采样时将同一个体样本分装多份进行备份，这样不仅防止样本不够，还避免了因解冻分装造成的反复冻融对代谢组检测准确度的影响。4、洁净：为防止对仪器的损害以及保证实验结果的准确可靠，需要保证所有取材器具的洁净度（例如无去垢剂、强酸强碱等污染），建议使用进口离心管，避免塑化剂污染。血浆样本采集步骤1、使用肝素钠抗凝管采集全血（2-4

Q1代谢组检测报告中哪些部分对发表文章是比较重要的？A◆样品制备描述：样本提取过程和预处理（例如衍生化）过程描述◆上机检测描述：色谱柱和质谱仪型号、色谱分离条件（流速、流动相组成、进样量）、流动相梯度洗脱程序、质谱检测参数◆原始数据：获取原始数据，例如总离子流色谱图（TIC）、.CSV格式数据◆数据预处理描述：基线矫正、去噪、峰对齐、峰识别、归一化等数据预处理过程描述（包括软件、数据库）◆优化数据：经过数据预处理获得的可以用于后续生信分析的优化数据◆图表描述：例如PCA、PLS-DA、OPLS-DA、差异代谢物鉴定、差异代谢物通路分析等生信分析流程描述（包括软件、数据库）◆QC描述：描述QC样本如何设置和体系稳定性好坏结果评判Q2代谢组常用的数据库有哪些？A◆总的说来GC-MS有成熟的商业数据库，例如NIST、GMD、FiehnLib数据库，而LC-MS缺乏成熟的商业数据库，一般参考HMDB、METLIN、MzCloud以及一些公司自建库。◆HMDB（http://www.hmdb.ca）：主要收录人体内源性代谢产物，是目前最完整的人类代谢物数据库，主要适用于LC-MS。◆METLIN（https://metlin.scripps.edu）：收录了不同物种内源性代谢物和外源性（例如药物代谢）代谢物，主要特征是含有大量代谢物的二级质谱图（MS/MS），主要适用于LC-MS。◆GMD

Q1非靶向代谢组和靶向代谢组一般选用什么质谱仪器？A质谱仪以离子源、质量分析器和离子检测器为核心，离子源是使分子在高真空条件下离子化的装置，电离后的分子因接受了过多的能量会进一步碎裂成较小质量的多种碎片离子和中性粒子，它们在加速电场作用下获取具有相同能量的平均动能而进入质量分析器，质量分析器是将同时进入其中的不同质量的离子，按质荷比m/e大小分离的装置，分离后的离子依次进入离子检测器，采集放大离子信号，经计算机处理，绘制成质谱图。质谱仪种类非常多，包括四级杆质谱（QMS）、飞行时间质谱（TOF）、三重四级杆质谱（QqQ）、四极离子阱（QTrap）、四级杆飞行时间串联质谱（QTOF）、离子阱-飞行时间质谱（TrapTOF）、静电场轨道阱质谱（Orbitrap）、线性离子阱质谱

rRNA基因总拷贝数>106），推断的绝对丰度可用于估计单个物种的生长率和收缩速率。图8推断的绝对丰度可以准确推断两个连续非阴性样品之间的动力学变化。（a，顶部）单个受试者A.

/mHC队列中，Veillonella和Fusobacterium的丰度随着肠道炎症的增加而增加。以前，在相对丰度分析的基础上，我们确定Enterococcus,

Firmicutes，Rikenellaceae和Clostridiaceae分别有48,192和175个序列与大肠杆菌的α-MSH表位具有100％的同源性，同一性均值分别为82.13%,

pneumoniae也明显富集，此外这两个物种在小鼠模型中与结肠炎发生有关。这些结果都表明LEA，AEA和NAE的组合足以将离体微生物群落从健康群落转变为类似IBD患者的群落组成。图4

等。这些分类群中的大多数以前都报到过与健康相关，包括短链脂肪酸（SCFAs）的产生和抗炎特性，以及与2型糖尿病和结直肠癌等疾病负相关。与之相反，“饮食阴性”OTUs主要为Ruminococcus

01Q代谢物和代谢组学的概念是什么？A代谢物（Metabolite）：传统的代谢概念既包括生物合成，也包括生物分解，因此理论上代谢物应包括核酸、蛋白质、脂类生物大分子以及其他小分子代谢物质，但为了有别于基因组、转录组和蛋白质组，代谢物只涉及相对分子质量约小于1000的小分子代谢物质，如氨基酸、脂肪酸、胆汁酸、维生素、糖、有机酸等，涉及代谢中间体和代谢产物。代谢组学（Metabolomics

inflammation中文题目：肠道菌群重塑肠上皮细胞DNA甲基化以控制肠道稳态和炎症期刊名：Nature

anaerobius）是一种选择性富集在结直肠癌患者粪便和粘膜微生物群中的厌氧菌，但其促肿瘤发生的致病作用和分子机制尚不清楚。我们证明厌氧假单胞菌粘附在结直肠癌粘膜上，加速了Apc

中国科学院南京土壤所王辉研究员课题组与南京农业大学生科院崔中利教授课题组合作的研究成果近期发表在环境科学与生态学TOP期刊《Science

cylinder模型方法研究了绿刺参岩藻糖基硫酸软骨素(fCS-Sc)的链构象和理化性质，同时通过16S扩增子绝对定量测序研究它对人体肠道菌群的影响。结果表明绿刺参岩藻糖基硫酸软骨素(fCS-Sc)

soil中文题目：高通量微生物绝对定量测序揭示不同施肥应用对种植番茄的滨海盐渍土壤细菌群落的影响期刊名：Science

通过qPCR技术，无论是标准菌株DNA或土壤DNA样本，反应体系中腐殖酸终浓度为50ng/ul时，与不加腐殖酸的对照组相比，得到的两组数据结果具有明显差异；●

两种定量方法中差异物种的对比箱体图注：不同颜色分别代表样本不同组别，横坐标表示该分类水平的差异物种，纵坐标为相对丰度（左：基于RQ）和绝对丰度值（右：基于AQ）；显著性标记：****

目前常规16S扩增子测序在分析样本间微生物组成时仅考虑微生物的相对丰度（比例），然而相对丰度信息不能反映样本中微生物物种真实的绝对丰度情况，从而对样品间菌群的真实变化分析造成严重误判，而且多篇研究文献已经证明只有绝对定量分析才能反映样本每种微生物的真实数量和组间样本的真实差异（点击阅读：浅谈：论微生物绝对定量VS相对定量的优越性），因此绝对定量才是微生态研究的首选。我司于去年下半年推出微生物16S扩增子绝对定量测序技术以来，受到医学肠道和环境微生物领域老师同学们的广泛欢迎和好评。今天小编就通过一系列实验数据系统展示一下绝对定量VS相对定量的优势！Demo实验设计将9种标准菌株DNA按一定比例混合，标记为标准品DNA。group1：向10ng标准品DNA（微生物DNA占比100%）中添加10n拷贝外标序列，共3个生物学重复；group2：将标准品DNA与hela细胞基因组DNA按照质量比1:9的比例混合，混合后微生物DNA占比10%，然后向上述10ng

ASD患儿肠道微生物组成改变为了解ASD组和TD组儿童肠道微生物群结构和功能组成的差异，进行了MWAS分析，发现19个显著不同的分类群：与TD组相比，ASD组儿童的11个分类群明显更高，包括3个

当前常规细菌16S扩增子测序方法能解析样本中的物种组成和其相对丰度信息，因此对微生态研究具有重要的促进作用。然而我们需要注意一点，那就是相对丰度并不能反映样本每种微生物的真实数量和组间样本的真实差异，这是为什么呢？这是因为由于常规细菌16S扩增子测序每个样本之间对应的

对于浓度较高的物种，相关系数较大；2）我们的微生物气溶胶种群分析表明，春季的真菌多样性（OTU数量）高于秋季（p=0.02），主坐标分析显示，类群分布存在明显的季节性差异（ANOSIM

添加叠氮化钠目的是抑制微生物的天然活性。在组别E9、E8、E7、E6、E5、E4时，将梯度浓度分别为2.1×1011-2.1×106cfu/ml的1.0ml菌株EDL933添加到每个土壤样品（30

HAAQ-GFP来准确解析土壤细菌群落及其动态变化的高通量绝对丰度定量方法（HAAQ）。确定该方法的最佳实验条件。研究不同阶段(土壤及其母质)和叠氮化钠处理土壤中的细菌种群分布及其动态变化。研究方法

“微生物16S扩增子绝对定量测序”技术的服务商，热烈欢迎各位老师与我们交流沟通~想了解更多“微生物绝对定量”内容，请点击链接：1、又一篇文章，再次阐明微生物相对定量不可以替代绝对定量；2、The

本文还提供了证据，证明微生物某一类群的富集（相对丰度比例的增加）不一定真正与相应微生物类群的生长（绝对丰度的增加）有关，可能是其它微生物类群的衰退是导致其在群落结构中相对丰度比例的增长。3.

7Q：直接送样本和送样本DNA有什么特别需要注意的事项？A：因为客户提供的样本则包括样本或样本DNA，所以微生物16S扩增子绝对定量测序提供的菌种拷贝数展现形式统一是：16S基因copies/

甲基化和转录组数据的整合分析确定了126个基因组位点，这些位点的DNA甲基化和RNA转录组的差异化主要与肠道微生物群的存在与否相关。图5微生物可通过DNA甲基化调节宿主基因表达。

在以往的日子里，得到您的信任和支持，这是我们最宝贵的财富和您给予我们最珍贵的礼物。在此新年即将到来之际，我们怀着感恩的心情向您表示最诚挚的祝福和亲切的问候!

天昊生物一直以来以提供最优质的遗传分析解决方案为己任，与合作伙伴密切合作，已成为国内基因及遗传分析领域性价比最高的技术服务提供商。2017年眼看就要过去了，这一年，天昊生物取得了怎样的成绩呢？

3043?便（LM）和黏膜（MAM）微生物群之间门分类水平上存在显著差异。例如LM中的主要菌群为拟杆菌门和厚壁菌门，其次是变形菌门，而MAM中最主要菌群为变形菌门，其次就是厚壁菌门和拟杆菌门。

DNA甲基化已被认为是精准癌症诊断的一种潜在生物标志物。然而，在ESCC中基于DNA甲基化的生物标志物研究十分有限。

抗结核药物引起的药物不良反应（ATD-ADRs），已经成为一个日益严峻的问题。对于ATD-ADRs遗传学因子研究将对于临床药物副作用管理有重大意义。

苦丁茶、葡萄糖（Glu）、蔗糖（SUC）、菊粉（INL）、糖麻（GOS）、乙酸、丙酸、n-butyric、i-butyric、n-valeric、i-valeric、2-ethylbutyric

会导致粪便丰富度增加。厚壁菌、拟杆菌、变形杆菌是主要的门，相对于对照组，高剂量PEP喂养组厚壁菌门的相对丰度明显减少，而拟杆菌门明显增加（图5a）；纲水平，高剂量PEP喂养组Bacterioidia

“天昊生物”2018秋季校园宣讲会和双选会，我们会在现场收取简历并直接进行初试，合适者安排复试，最后通知录用。

modules在PHTN和HTN组减少，主要包括：支链氨基酸的合成运输、酮体生物合成、双组分调节系统、甲硫氨酸和嘌呤降解（图4B），这些代谢功能对宿主是必不可少的。17个KEGG

三七-玉米系统的细菌多样性和均匀度显著高于三七单作系统（表3），两个系统在细菌丰富度没有明显差异。三七-玉米系统的真菌丰富度显著低于三七单作系统（表3），两个系统在真菌多样性和均匀度没有明显差异。

第一成分（RDA1）可以把初始土壤组（CK）和三种施肥处理组分开，而第二成分（RDA2）则不能区分开这三种施肥处理组（图4A）。根据施肥制度不同，土壤样品的真菌群落则分成明显不同的四组（图4B）。

声明：由于学术搜索引擎收录各SCI期刊的速度不同，可能本次统计与文章实际接收发表时间有所出入。

原理：使用琼脂糖凝胶作为固体介质，借助琼脂糖凝胶的分子筛作用，混悬于溶液中的样品电荷颗粒在电场影响下向着与自身相反电荷的电极移动，核酸片段因其分子量或者分子形状的不同，电泳移动速度有差异而得到分离。

研究原因：种质资源中有大量的天然杂种，在实际生产中，有时对一些品种的亲本无法加以判断，因此可利用品种的指纹图谱，对其进行相应的聚类分析，可以对供试材料进行聚类分析，以确定物种之间的亲缘关系。

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突变筛选条件：频率在1000G和ExAC高于0.01；无义，移码和剪切突变，以及被软件预测有害的错义突变，具有2个功能缺失的突变的基因，都被保留进入后续分析。

为了分析三种施肥制度对下一茬作物生长的影响，在温室下进行了另外的盆栽试验。番茄单一轮作5次后，每个盆收集300g土壤，然后转移到一个新的含有21天大小番茄的盆中，生长4周后，使用Minolta