CiRS-7通过调节miR-7/HOXB13轴促进ESCC的生长和转移

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声 明

食管癌是最常见的胃肠道恶性肿瘤之一，也是世界上癌症相关死亡的第六大病因。 食道癌可以将组织病理学分为两个共同点类型：食管腺癌（EAC）和食管鳞状细胞癌（ESCC）。 虽然在西方国家的EAC发病率的增长速度很快，但是在东亚尤其是中国的患者一般被诊断为ESCC。 通常患有鳞状食道癌的患者都会出现吞咽疼痛，吞咽困难，体重减轻等一系列的症，这给患者带来的痛苦是很大的，食道癌经过癌基因、癌前病变、亚临床期、原位癌、转移癌等，五个漫长的阶段，大约需要2-20年，其胶元纤维的包围圈越来越薄弱，其毛细血管的数量，是从无到有，从少到多，最后成为一个毛细血管团。ESCC的主要问题是在疾病晚期阶段之前，无法及早被发现和诊断，导致患者的5年生存率极差。 建议用于ESCC的早期阶段治疗的办法就是手术，但是手术只对30-40％的晚期患者可行。

最近华中科技大学同济医学院附属同济医院房明浩医师在Cell Death & Disease杂志在线发表了题为“CiRS-7 promotes growth and metastasis of esophageal squamous cell carcinoma via regulation of miR-7/HOXB13”的研究。研究发现CiRS-7的表达水平在ESCC肿瘤组织中明显上调，与病人存活率低有关。体外过表达CiRS-7会抵消miR-7抑制癌细胞增殖、迁移和侵袭的能力，同时体内过表达CiRS-7可以促进肿瘤生长和肺转移。机制上，其实是CiRS-7作为miR-7的sponge，抑制miR-7的功能而重新活化其下游HOXB13介导的NF-κB/p65通路。该研究提示CiRS-7也可以作为ESCC的预后生物标志物和治疗靶点。

因为CiRS-7作为miR-7的sponge，调控miR-7功能的机制，已经在胃癌、直肠癌等肿瘤中被研究过了，而这篇文章就告诉了我们套路，选择另一种癌症ESCC来证明CiRS-7与miR-7的关系，虽然文章IF不是特别高，但是也高于5分（IF=5.638），足以让一个博士毕业了，希望研友能get到这种没有RNA-seq和特别高级实验技术也能发文章的套路。

1. 作者首先明确了ESCC肿瘤标本和体外ESCC细胞系中中明确ciRS-7和miR-7的表达水平，然后分析了ciRS-7和miR-7的表达水平与病人预后（OS、DFS指标）的关系分别为正相关和负相关。ciRS-7、miR-7和TNM分期被确定为ESCC的独立预后因素。

2. 作者挑选出ciRS-7表达水平相对较低的ESCC细胞系Eca109 和 KYSE150，在其中分别单独转染miR-7, 过表达ciRS-7和同时过表达两者后，体外通过CCK8实验、克隆形成实验，说明ciRS-7会抵消miR-7抑制肿瘤生长和增殖的能力；体内通过成瘤体积和肿瘤Ki67染色结果也说明ciRS-7会抵消miR-7抑制肿瘤生长和增殖的能力。

3. 在Eca109 和 KYSE150细胞分别单独转染miR-7, 过表达ciRS-7和同时过表达两者后，体外通过迁移和侵袭实验，证明了ciRS-7就是通过miR-7促进肿瘤侵袭和迁移；体内回输过表达的Eca109细胞成瘤，发现miR-7组细胞成瘤后转移的情况很少，而同时过表达ciRS-7则会出现促进其肺部转移的情况。

4. 既然ciRS-7可抑制miR-7的功能，那ciRS-7有可能促进了miR-7下游靶向调控的基因表达。根据miRNA预测数据库和已有的研究报道，HOXB13的3′-UTR可能会与miR-7相结合。荧光素酶报告基因实验证明了HOXB13的3′-UTR可以与miR-7相结合。过表达miR-7可以下调HOXB13的表达，而后再过表达ciRS-7上调HOXB13的表达。过表达HOXB13可以抵消miR-7对HOXB13表达水平的抑制。

5. 为了明确ciRS-7/miR-7轴促进ESCC恶性增殖是否由HOXB13介导的，通过克隆形成和迁移实验，发现转染miR-7的确可以抑制肿瘤的增殖和迁移，而同时过表达ciRS-7或者HOXB13也的确会抵消miR-7的抑制效应，但是如果再同时敲低HOXB13的话，miR-7抑制肿瘤增殖和迁移的能力还是很明显的，说明ciRS-7/miR-7轴下游的靶基因是HOXB13。

据已有研究报道，HOXB13可通过NF-κB信号通路促进肿瘤的恶性转化。MiR-7组和si HOXB13组的p-p65蛋白水平明显下调，而ciRS-7/miR-7同时过表达组的p-p65蛋白水平明显上调(c)。而且ESCC病人的ciRS-7 和 miR-7的表达水平成负相关（d），而且基于ciRS-7 和 miR-7的表达水平，预测病人的存活率，分为高风险（ciRS-7高 和 miR-7低）、中等风险（ciRS-7高 和 miR-7高或者ciRS-7低和 miR-7低）和低风险（ciRS-7低和 miR-7高）三种类型。

6. ESCC肿瘤样本中也发现了HOXB13表达水平的上调，而其水平与miR-7成负相关。基于HOXB13的表达水平也可将病人分为高风险（HOXB13高）和低风险（HOXB13低）的患者。免疫组化结果、qPCR和WB结果都发现，肿瘤样本中高表达水平的ciRS-7和低表达水平的miR-7通常与高表达水平的HOXB13和p-p65相对应。

参考文献

1. Rui-chao Li, et al. CiRS-7 promotes growth and metastasis of esophageal squamous cell carcinoma via regulation of miR-7/HOXB13. Cell Death Dis. 2018 Aug 6;9(8):838. doi: 10.1038/s41419-018-0852-y.

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