经典力作|季维智-第一次使用CRISPR方法产生转基因猴

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编者按：总是会有人说，周杰伦的经典歌曲是《稻香》，《双节棍》等；刘德华的《忘情水》，《来生缘》等，这些歌曲都是百听不厌，常听常新的，而且听起来的感觉都是不一样的。但是，怎么评价学术界的经典文章或者是成名作呢？有的人认为，发的影响因子越高越好，这样就是经典文章。但是，iNature认为，作为经典文章，肯定使用的人很多，而且看的人也是拍手叫绝，所以我们是根据总引用量，来客观的评价一篇文章。今天就推出季维智高引用量的一篇文章（非综述类），以飨读者。

iNature：猴子作为研究人类疾病和开发治疗策略的重要模式种类，但猴子在生物医学研究中的应用受到在特定的基因产生转基因动物的困难，显著的阻碍了其进一步的发展过程。 在这里，季维智首次应用CRISPR / Cas9系统，一种编辑不同生物基因的多功能工具，以猴基因组为靶标。 通过将Cas9 mRNA和sgRNA共注入一个细胞阶段的胚胎中，成功实现了食蟹猴中的精确基因靶向。 另外季维智等研究组还显示该系统能够同时破坏两个靶基因（Ppar-γ和Rag1），通过综合分析没有检测到脱靶诱变。 因此，用Cas9 mRNA和sgRNAs共注射单细胞阶段的胚胎，是基因修饰的食蟹猴产生的有效且可靠的方法。

由于它们与人类在遗传和生理特征方面有着密切的相似性，因此猴子已经成为模拟人类疾病和开发治疗策略的最有价值的模型之一。基因改造对猴子模型的产生，必定是无价的。尽管使用逆转录病毒或慢病毒载体成功地产生了几种转基因猴子。猴子中精确的基因组靶向，是最有希望产生人类疾病的模型，至今尚未实现。

敲除的俩个基因

最近描述的成簇规则间隔短回文重复序列（CRISPR）/ Cas9系统通过小RNA将目标基因编辑到想要的位点。 CRISPR / Cas9系统已经被证明是一种易操作，高度特异，高效且可反复使用的真核生物基因组工程方法。到目前为止，该系统已成功用于靶向哺乳动物细胞系中的基因组位点，包括小鼠和大鼠。但在灵长类动物中是否可行还不清楚。

突变体猴子的表型

通过利用CRISPR / Cas9的优势，季维智通过Cas9 mRNA和sgRNA共注射一个细胞阶段的胚胎，在小鼠和大鼠中实现了高效的基因靶向。在CRISPR / Cas9介导的基因靶向以及猴早期卵裂期胚胎的基因操作的鼓励下，季维智将CRISPR / Cas9系统的应用扩展到了在猴的一个细胞阶段的胚胎中，进行多基因敲除，并成功地获得了具有两种基因修饰的转基因猴子。

方法流程总结

总之，季维智目前的研究表明，通过将Cas9 mRNA和sgRNA共注入单细胞受精卵，可以在猴子中有效地实现位点特异性基因修饰。 另外还证明，可以一次建立多个基因突变而没有检测到脱靶效应，这证实了CRISPR / Cas9系统适用于灵长类动物-猴基因组的靶向。

原文链接

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0092867414000798

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