甲贝课堂 | 唾液酸 (RPLC) 分析方法测试
唾液酸及其结构
唾液酸(Sialic Acid, SA)是一类酸性九碳单糖的衍生物，是所有神经氨酸或酮基-脱氧壬酮糖酸(KDN)的N-或O-衍生物的总称。SA作为一种天然存在的碳水化合物，广泛分布于动物组织中，以复合糖的组合形式，镶嵌于所有细胞表面以及大多数脊椎动物糖蛋白和糖脂分子的末端最外侧[1]。SA参与或调节机体发育、炎症、肿瘤等众多生理过程（图1），准确及时地检测SA水平可对部分恶性肿瘤进行诊断和监控.与人类健康和疾病防控密切相关，已成为糖生物学研究热点之一。
在生物学功能方面，唾液酸由于其自身的负电荷和亲水性，所以具有许多结构或生理活性，例如神经可塑性、肾小球滤过或血细胞电荷排斥等。其次，SA是各种病原体和毒素结合位点的组成部分，在大多数此类相互作用中，病原体结合蛋白（外源受体）需要识别特定形式的唾液酸。图2展现出了SA结构的多样性:
图2：唾液酸的多样性结构[2]
在九碳的基础结构上，除C3和C6之外，其余C均连接有R基团，正是因为R基团的变化组合使得唾液酸结构的多样；
核心功能结构主要有4个，主要在于C5所连基团的变化。
经过对以往经验的总结，通过超高效液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC）对唾液酸进行检测是最简洁、快速的方式之一。
服务内容
甲贝医药基于UPLC技术平台，为客户提供蛋白原液中唾液酸含量分析服务。
图3 唾液酸DMB荧光标记反应流程
仪器信息
甲贝医药所采用ACQUITY UPLC I-Class仪器分析，整体在分离度和准确性上都有出色表现，可以很好地提供SA高灵敏度检测。
图4 相关仪器及软件
检测流程
1. 先对蛋白样品在乙酸、90℃条件下进行唾液酸释放处理；
2. 经标记试剂(DMB) 标记后，转化成为带有荧光效应的产物；
3. 根据试剂盒中提供的NANA和NGNA标准品来配制唾液酸组合标准品；
4. 使用UPLC在合适的流动相梯度下进行分离(0.1%FA+CAN & 0.1%FA+H2O)；
5. 经UPLC分析后的数据制作标准曲线，将样品峰对标标准曲线，从而获得唾液酸含量信息。
案例分析
下图是甲贝医药检测唾液酸构型及含量测试的数据，有图片可知：样品中明显存在两种唾液酸NANA和NGNA。
图5 唾液酸构型含量测试
送样要求
样品浓度：≥0.5 mg/mL；
样品形式：液体或制剂；
保存方式：冷冻保存
参考文献：
[1] 张嘉宁，汪淑晶。唾液酸生物学与人类健康和疾病。生命科学，2011，23(7).
[2] Varki A, Schauer R. Sialic Acids[M]//Varki A, Cummings RD, Esko JD, et al. Essentials of Glycobiology. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2009.
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