【指南下载】为什么选择Nanopore cDNA测序 & 如何开始

通过多次化学改进，结合我们测序平台和软件的升级，新一代纳米孔cDNA测序可在大量减少RNA起始量的条件下，以迄今最佳的测序通量生成全长转录本。用户可选择由1ng PolyA+ RNA的低起始量开始。在单个MinION芯片上（1000 – 1500万条读长全长转录本）进行高覆盖度的完整全转录组测序，或是在Flongle上进行更小型的快速筛查。

请阅读RNA测序的变革：Oxford Nanopore推出新型cDNA测序试剂盒，并观看以下视频，了解更多：

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我们为您悉心总结了一系列问题的指导，包括为什么选择Nanopore cDNA测序? 该选用那种试剂盒? 如何设计实验方案? 关于RNA和cDNA样本文库? 哪种设备适合我? 需要多少数据? 如何分析数据? 在快速阅读下文，了解Nanopore cDNA的优势要点后，可扫描文末的二维码下载常见问题指导。

对RNA进行测序的能力为众多的生物研究应用提供了宝贵的参考依据，揭示了从单细胞到整个组织的转录组动力学。在医药领域，鉴定差异剪接的异构体和融合转录本，可以为疾病的诊断和治疗提供信息。尽管使用短读长cDNA测序技术在转录组分析方面取得了许多进展，但仍存在一些缺点，如：

• 转录本长度通常为几千碱基对：典型的人类基因包含12个外显子，每个外显子的平均长度为236个碱基对，而且在95%的人类基因中发现了选择性剪接。

• 短读长仅能部分覆盖转录本的长度，因此依赖计算重构准确的异构体组装非常困难，短读长也表现出高比率的多重定位。

使用纳米孔测序，没有读长上限的限制：不需要进行长度选择，整个转录本可以进行单读长的端到端测序，实现了简单、准确的组装。并能区分高度相似的异构体、识别新转录本以及检测融合。此外，多重定位的比率显著降低。同时还有以下优势：

• 同时调查和鉴定异构体复杂性和相对丰度

• 针对全长mRNA转录本进行优化和富集的实验方法

• 低或无PCR偏差的长读长数据选择

• 单一样本，单一工作流程

• 明确识别、定位和计数每次读长

• 简单的生物信息学分析途径

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