RNA提取实验常规样本采集（一） | RNA专题

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往期RNA专题精彩汇总：

今天，我们来说一说RNA实验常规样本——动植物及细胞样本的采集。

01

动物组织/临床组织采集

动物组织/临床组织采集（建议送样量>=200mg）：

1.取新鲜组织，组织体积要小，尽量长宽高≤0.5cm，考虑到可操作性，所切组织块的大小可参考绿豆颗粒的大小。

2.去除非研究的组织类型（如结缔组织，脂肪组织等），如果是临床病变组织的取材要正确判断病变以及正常组织，应将病变组织周围的正常组织去掉，反之亦然。

3.迅速用预冷的RNase-free水配制的1XPBS或生理盐水清洗组织表面的污渍，吸干表面的液体。

4.处理好的组织迅速放入预冷好的已写好编号的RNase-free的螺纹冻存管中，液氮中迅速冷却1小时后，于-80℃，长期保存,在RNA提取前避免反复冻融。

不同组织RNA的得率：

注意：

1.对于需要RNAlater及类似保存液保存的样本，严格按照操作说明进行，组织块需切成长宽高为0.5cm的小块，组织块过大会影响RNAlater渗透入组织内部的效率，组织块过大也会造成RNAlater无法完全覆盖组织，而未被RNAlater覆盖的组织部位极易被Rnase降解。

2.不允许寄送用裂解液保存的组织样本，因为实验中发现，除了用trizol保存细胞的样本外，用裂解液保存的组织样本，无论是研磨好的粉末还是切割好的组织块，所抽提的RNA质量普遍很差。

3.动物及临床组织不要使用锡箔纸包裹，锡箔纸容易与动物及临床组织粘一起，RNA抽提的过程锡箔纸容易带入，引起污染。

02

植物组织采集

植物组织采集（建议送样量>=200mg）：

1.选取新鲜、幼嫩、生长旺盛的组织部位，植物组织越幼嫩越新鲜所含的次生代谢产物越少，随着植物的逐渐成熟，所含的次生代谢产物产量越来越多，而次生代谢产物会影响RNA的抽提，次生代谢产物越多，RNA抽提越困难，RNA的得率也越低。组织块要切割成长宽高≤0.5cm的小块，考虑到可操作性，所切组织块的大小可参考绿豆颗粒的大小。

2.（植物组织可选做）迅速用预冷的RNase-free水配制的1XPBS或生理盐水清洗组织表面的污渍，吸干表面的液体。

3.处理好的组织迅速放入预冷好的已写好编号的RNase-free的螺纹冻存管中，或用标记好名称的锡箔纸包裹好，液氮中迅速冷却1小时，转移到-80℃长期保存,在RNA提取前避免反复冻融。

拟南芥不同组织部位的RNA得率：

注意：

1. 植物组织不要使用RNAlater保存，因为植物组织含有细胞壁及次生壁，RNAlater不易渗透入组织内部；也勿用trizol直接浸泡植物组织。

2.不允许将植物组织磨成粉寄送，尽量送完整的组织。

3.表面含有较多蜡质的植物样本或次生代谢产物含量极高的植物组织或植物组织的茎和根及种子RNA得率通常会较低，为提高RNA的得率需要加大送样量，为普通样本送样量的3-4倍。

03

细胞样品的采集

细胞样品的采集：（细胞数： 3X10⁶~1X10⁷）

贴壁细胞的处理：

1.从培养箱取出贴壁生长细胞，显微镜下观察细胞，确定生长状态良好。

2.加入  3ml的1X PBS(RNase-free水 配制)，弃PBS，洗 2 次。

3.加入适量裂解液反复吹打至裂解充分。

4.转移至尖底离心管中，-80℃长期保存或通过干冰运输寄出。

悬浮细胞的处理：

1.选取生长状态良好的细胞悬液。

2.200g离心5min，得到细胞沉淀弃培养基。

3.加入  3ml的1XPBS(RNase-free水 配制)悬起细胞沉淀，200g离心5min，弃PBS，洗2次。

4.加入适量细胞裂解液反复吹打至裂解充分。

5.转移至尖底离心管中，-80℃长期保存或通过干冰运输寄出。

LCB推荐以下裂解液裂解细胞样品：

注意：

1.细胞必须裂解充分后再寄送，勿将干冻的细胞直接寄送，因为细胞冷冻的过程中冰晶很容易刺破细胞，此时破碎的细胞会释放内源性RNase，从而降解RNA。

2.细胞裂解是否充分很关键，细胞裂解充分的标志：细胞与裂解液的混合物形成清亮不粘稠的液体，且没有细胞团块残留 ，如果细胞样品始终粘度很大，说明该细胞样品仍未裂解充分，此时应继续补加裂解液，以100ul为梯度进行补加，直到样品完全裂解充分。

细胞样品勿用胰酶消化，胰酶会消化细胞膜上的膜蛋白，导致细胞破裂，破裂的细胞会释放RNase导致RNA降解。

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