微量单细胞转录组smart-seq2细胞防污染注意事项
微量扩增试剂盒扩增效率十分高，一旦发生污染，会严重影响测序数据，甚至造成数据 无法分析，导致实验失败：
样品准备过程中需要注意的细节
（1） 在细胞培养，实验，分离过程中一定等要严格避免其他细胞或微生物污染，流式 细胞仪一定要严格执行无菌操作。使用的一次性耗材（培养皿，离心管等），必须保证 无菌。
（2） 培养过程中镜检监控可能存在的污染: 细菌：为黑色细沙状，不同细菌有不同外形，培养液一般会浑浊变黄。真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物。
支原体：200-300 纳米左右，常规光镜检验可能无法发现，培养液一般会浑浊。
（3）细胞分选过程，清洗仪器使用的消毒水，75%乙醇等，必须新鲜配制。
（4） 使用离心管或冻存管收集细胞，不要使用 96 孔板等无盖容器，否则在低温冻存 或运输过程中封膜容易失去粘性而脱落。
（5） 后续需要进行 RNA 提取操作的细胞样品采用容积为 500ul-1.5ml 离心管或冻存 管收集。无论采用什么类型离心管或冻存管，使用前均需要在超净台上以紫外灯 照射 20min 以上。
（6）可能的情况下，尽量选取更多的细胞数量。
实验质控
微量扩增实验，因样品起始量极少 所用试剂盒扩增效率十分高，一旦样品被污染，则可能后期测序数据中得到大量无用数
据。因此，整个实验过程中需要严格质控。
（1）实验全程阴性质控：每一批次实验开始时即做一空白对照，实验开始时即以一空
白样品，参与全程的酶消化，细胞培养，分离，提取，扩增等过程，如扩增除引物二聚体外 未出现其他产物，则可认为实验过程中无污染，可进行后续建库测序。
（2）细胞培养过程中，通过镜检等方式，排查细菌、真菌、支原体等微生物的污染。
（3）流式细胞仪分离过程，流式细胞仪分离过程中，如过环境，仪器不够洁净或无菌 操作执行不够严格，使用的试剂耗材被污染等情况，对样品造成污染，因此有必要在进行分 选时增加一个阴性对照。
阳性对照：293 细胞扩增产物质检结果
阳性对照：无核酸酶水扩增产物质检结果